Western技术大全..doc

Western技术大全 from 生物通技术专题：既可以定性，又可以半定量的Western是初步鉴定蛋白质最方便也是最通用的方法。Western印迹要想做的好，当然每个步骤都不能马虎，看看这张图，从电泳，转膜，封闭，一抗，二抗到最后的检测，就像“发现号”升空的120万个步骤那样一个也不能少。如果忽视了其中的一步，结果做不出来，也是令人非常头痛的。 ?? “工欲善其事，必先利其器”，要想有好的实验结果，好仪器是相当重要的，因此让我们先来看看什么样的仪器能让我们无后顾之忧，顺利痛快的一步到位。? ??? Western 印迹的仪器主要就是电泳系统和电转移系统了，最好的品牌当然是Bio-Rad和Amersham（GE Healthcare）的Hoefer系列了，现在国内出品的物美价廉的电泳系列产品，也是不错的选择，几乎每个实验室都需要至少一套Mini Cell吧？如果还没有你该怎么挑选呢。 一、Bio-Rad经典Mini系列??? Bio-Rad Laboratories由 David Schwartz 先生和妻子化学家Alice Schwartz于1957 年创建，总部位于加州 Hercules，下设三大部门——生命科学部，临床诊断部和工业材料部，其中生命科学部成功跻身世界排名前五名。在2004年，Bio-Rad还低价收购了因侵犯知识产权限于困境的MJ Research，使得伯乐在PCR领域的市场份额骤然扩大。Bio-Rad生命科学部产品包括蛋白组研究产品、层析仪与填料、蛋白质和核酸电泳产品等，不过最为普通实验室熟悉的莫过于蛋白电泳Mini系列和层析仪。只要是提到SDS，Bio-Rad绝对是每个实验室首先考虑的品牌，经典就是经典呀。??? Mini-PROTEAN3电泳系统与Mini Trans-Blot转移系统这一套Mini系列可谓是Bio-Rad最多人熟悉和称道的产品了。自上个世纪50年代Raymond利用聚丙烯酰胺凝胶的分子筛性质来延缓蛋白质的迁移率从而达到分离蛋白的目的以来，经过这么多年来的发展， SDS电泳技术已经基本成熟了。而且在操作手段方面也越来越简便，越来越准确。Mini Protein Cell的出现使得Western的制胶和电泳的消耗成本更经济、操作更简便快速——这种简便也间接促进了Western技术的更广泛采用。而Mini-PROTEAN 3 自被生产出来那天就可以说是“踩在巨人的肩膀上”，因为它吸取了Bio-Rad之前第一代和PROTEAN 2微型垂直电泳仪的优点，并在其基础上进行了优化，所以获得了全球实验人员广泛的认同与喜爱。 ??? Mini-PROTEAN 3的优点可以概括为8个字——用途广泛，操作简便。由于Mini-PROTEAN 3可以用于SDS变性电泳、非变性电泳、Tric-Tricine电泳、等电聚焦和酶谱分析，以及dsDNA、ssDNA和RNA的电泳分离，因此可以说只要实验室有一套Mini-PROTEAN 3，足以应付常规垂直电泳需要了。Mini-PROTEAN 3体现了Bio-Red不断改进的努力方向——设计人性化，令操作更简便——这在各个细节都可以体现，比如说为了防止制胶过程出错，Mini在玻璃板，夹合器（固定玻璃板的装置）以及电泳槽里等处分别都有注明正反位、夹板高度或正负极；方便的夹子取代了以前需要拧4个螺丝来固定玻璃板的麻烦。由于未交联的聚丙烯酰胺本身是神经毒素，因此每个实验者都希望操作能简单快速，尽可能减少讨厌的意外“事故”——漏胶的发生。Mini-PROTEAN 3巧妙的设计使得配胶快速方便的同时更大大减少漏胶的几率。除此之外，Mini的加样容量也是可以多样选择的，包括10-well (30 μl)，15-well (15 μl)，10-well (50 μl)，12-well (20 μl)，9-well (30 μl)，IPG comb (7 cm IPG strip)。??? 电泳结束后就要转膜。同系列的Mini Trans-Blot可以说是Mini-PROTEAN 3的“完美拍档”，它们组合在一起就是做Western印迹实验的最好选择之一了。说它好，当然是有原因的，由于Mini Trans-Blot在转移过程当中的三个关键步骤里设计巧妙，帮助转移顺利进行，提高了转膜效率，因此才会得到如此多的用户的赞赏。第一就是在夹板盒，由于转膜过程中的气泡问题对于实验结果有很大的影响——试想一下，在特异带显色处正好有一个气泡，那么本来可以很漂亮的结果就付之一炬了，甚至可能会造成假阴性结果。Mini Trans-Blot的夹板盒通过两块海绵与封口式设计帮助减少气泡的存在，同时夹板盒多孔的设计也可以在压制过程中使缓冲液均匀的渗出，减少气泡。其次，转膜槽的人性设计。试问一下，在转膜中