冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）..doc

冻干人用狂犬病疫苗（Vero 细胞） Donggan Renyong Kuangquanbing Yimiao(Vero Xibao) Rabies Vaccine for Human Use（Vero cell）， Freeze-dried 本品系用狂犬病病毒固定毒接种于Vero细胞，经培养、收获、浓缩、灭活病毒、纯化后，加入适宜稳定剂冻干后制成，用于预防狂犬病。 1 基本要求 生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”有关要求。 2 制造 2.1 生产用细胞 生产用细胞为Vero细胞。 2.1.1细胞管理及检定 应符合“生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程”规定。各种子批代次应不超过批准的限定代次。 取自同批工作细胞库的1支或多支细胞管，经复苏扩增后的细胞仅用于一批疫苗的生产。 2.1.2 细胞制备 取工作细胞库中的1支或几支细胞管，细胞复苏、扩增至接种病毒的细胞为一批。将复苏后的单层细胞用胰蛋白酶或其他适宜的消化液进行消化，分散成均匀的细胞，加入适宜的培养液混合均匀，置37℃培养成均匀单层细胞。 2.2毒种 2.2.1名称及来源 生产用毒种为狂犬病病毒固定毒CTN-1V、aGV株或其他经Vero细胞适应的狂犬病病毒固定毒株。 2.2.2种子批的建立 应符合“生物制品生产和检定用菌毒种管理规程”规定。各种子批传代应不超过批准的限定代次。狂犬病病毒固定毒CTN-1V株在Vero细胞上传代工作种子批传代次数应不超过35代，aGV株在Vero细胞上传代工作种子批传代次数应不超过15代。 2.2.3种子批的检定 主种子批应进行以下全面检定，工作种子批应至少进行2.2.3.1-2.2.3.4项检定。 2.2.3.1鉴别试验 用小鼠脑内中和试验鉴定毒种的特异性。将毒种作10倍系列稀释， 取适宜稀释度病毒液与等量抗狂犬病病毒特异性血清混合，同时设立正常血清对照组， 试验组与对照组的每个稀释度分别接种11-13g小鼠6只，每只脑内接种0.03ml， 观察14天，中和指数应不低于500。 2.2.3.2 病毒滴定 毒种作10倍系列稀释， 每个稀释度脑内接种体重为11-13g小鼠至少6只，每只脑内接种0.03ml， 观察14天，病毒滴度应不低于7.5 LgLD50 /ml。 2.2.3.3无菌检查 依法检查（附录XII A ）， 应符合规定。 2.2.3.4 支原体检查 依法检查（附录XII B ）， 应符合规定。 2.2.3.5病毒外源因子检查 依法检查（附录XII C）， 应符合规定。 2.2.3.6免疫原性检查 2.2.4 毒种保存 毒种应于-60℃以下保存。 2．3 原液 2．3．1 细胞制备 同2.1.2项。 2．3．2培养液 培养液为含适量灭能新生牛血清的MEM、199或其他适宜培养液。新生牛血清的质量应符合规定（附录XIII D）。 2．3．3 对照细胞外源因子检查 依法检查（附录XII C），应符合规定。 2．3．4病毒接种和培养 细胞培养成致密单层后，毒种按0.01-0.1 MOI（同一工作种子批应按同一MOI接种）接种，置适宜温度下培养一定时间后，弃去培养液，用PBS冲洗去除牛血清，加入适量维持液，置33-35℃继续培养。 2．3．5 病毒收获 经培养适宜时间，收获病毒液。根据细胞生长情况，可换以维持液进行多次病毒收获。同一细胞批的病毒收获液检定合格后可合并为单次病毒收获物。 2．3．单次病毒收获液检定 按3.1 项进行。 2．3． 单次病毒收获液保存 于2-8°C保存不超过30天。 2.3.合并、浓缩 同一细胞生产的多个单次病毒收获液检定合格后可进行合并。合并后的病毒液，经超滤或其他适宜方法浓缩至确定的蛋白质浓度范围 2．3． 病毒灭活 于浓缩后的病毒收获液中按1：4000的比例加入β—丙内酯，置适宜温度灭活病毒，并于适宜的温度放置适宜的时间，以确保β-丙内酯完全水解。病毒灭活到期后， 每个灭活容器应立即取样，分别进行病毒灭活验证试验。 2.3．1 纯化 灭活后的病毒液采用柱色谱或其他适宜的方法进行纯化，纯化后可加入适量人血白蛋白或其他适宜的稳定剂即为原液。 2.3．1 原液检定 按3.2项进行。 2.4 半成品 2．4．1 配制 用疫苗稀释液将原液按同一蛋白质含量及抗原量进行配制，配制后总蛋白质含量应不高于80μg/剂， 并加入适宜的稳定剂即为半成品。 2.4．2 半成品检定 按3.3项进行。 2．5 成品 2．5.1分批 应符合“生物制品分批规程”规定。 2．5.2 分装及冻干 应符合“生物制品分装和冻干规程”规定 2．5.3规格 复溶后每瓶0.5ml。 每1次人用剂量为0.5ml，疫苗效价应不低于2.5IU。 2．5.4 包装 应符合“生物制品包装规程”规定 。 3检