食品微生物8 微生物分离、纯化与保藏技术.ppt

砂土管保藏法的优点 具低温、干燥、隔氧和少营养物等条件 保藏期较长、效果较好。某些抗生素产生菌保藏期可达18年(土霉素和链霉素产生菌)到22年(新霉素产生菌)，但对利福霉素、卡那霉素、四环素等容易产生变异的菌种，就不适合作长期的沙土管保存。 微生物移接方便，经济简便。 (三)菌种保藏方法： 菌种的保藏与菌种管理 3、矿油保藏法（石蜡油低温保藏法） 长好的斜面菌→覆盖灭菌液体石蜡 →菌体与空气隔绝→ 直立保藏于-4～4℃低温或室温 注意事项： 斜面培养菌种，斜面不宜过长； 纯净优质石蜡油，置三角烧瓶经121℃高压蒸汽灭菌1～2h，放烘箱中(160℃左右)干热处理，除灭菌时渗入水分，待石蜡油变清澈透明后冷却即可加入斜面，斜面上不能出现气泡，液蜡添加量以高出斜面顶部约1cm左右为宜。 (三)菌种保藏方法： 菌种的保藏与菌种管理 矿油保藏法特点： 适用于各大类不产孢子的微生物菌种的中期保藏 不适用于能分解烃类的菌种的保藏。 主要保藏措施是低温、阻氧。 一般可保存1～2年左右。 (三)菌种保藏方法： 菌种的保藏与菌种管理 4、真空冷冻干燥法 低温下快速将细胞冻结，然后在真空条件下干燥、封装，隔绝空气，微生物的生长和酶活动停止。达到长期保藏的目 (三)菌种保藏方法： 菌种的保藏与菌种管理 真空冷冻干燥法优点： 具低温、干燥、除氧主要因素，适用于除丝状真菌的菌丝体外的其它各类微生物。 菌种存活时间长、效果好，一般可保存5年以上，有的可保藏15年以上不发生变异。 体积小、不易污染、便于运输，为最广泛的菌种保藏法。 (三)菌种保藏方法： 冻干保藏的效果因微生物种类而异，一般是细菌＞放线菌＞真菌＞藻类，而菌丝体不宜用此法保存。 菌种的保藏与菌种管理 冷冻真空干燥操作流程 安培瓶 配制保护剂 灭菌 菌种 培养 制备菌悬液 分装安培瓶 洗净烘干 装标签 灭菌 预冻 真空干燥 测定水分 熔封管口 检查真空度 保藏 无菌血清或脱脂牛乳 -40℃冰箱速冻结20～60min 1%～3% 5、滤纸保藏法 方法：3#滤纸剪成5mm×50mm小条，放入干燥培养皿中灭菌。 将培养好的菌种用灭菌脱脂乳或奶粉复原乳制成孢子悬液， 用灭菌镊子将灭菌滤纸条在灭菌操作下浸入菌悬液，充分吸 附菌细胞，取出后放入灭菌小试管或安瓿管中，在真空干燥 机上抽干，真空条件下火焰熔封，冷藏 将要保藏微生物细胞或孢子吸附在灭菌滤纸上，干燥后冷藏。 (三)菌种保藏方法： 菌种的保藏与菌种管理 不同的保存方法都有一定的不足，因此， 尽量同时用多种方法保存 (三)菌种保藏方法： 菌种的保藏与菌种管理 （四）微生物的保藏机构 中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM) 中国典型培养物保藏中心(CCTCC) 美国典型菌种保藏中心(ATCC) 荷兰霉菌中心保藏所(CBS) 英国国家典型菌种保藏中心(NCTC) 大阪发酵研究所(IFO) 世界菌种保藏联合会(WFGG) 菌种的保藏与菌种管理 中国科学院典型培养物保藏委员会 中国普通微生物保藏管理中心 中国病毒保藏中心 细胞库 昆明细胞库 基因库 植物离体种质库 稀有濒危特有植物种质库 海洋生物种质库 淡水藻种质库 中国工业微生物菌种保藏中心 / 中国微生物菌种包藏管理条例 病原微生物实验室生物安全管理条例 动物病原微生物菌（毒）种包藏管理办法 四、微生物的菌种管理： 菌种的保藏与菌种管理 * * * * 微生物检验基础技能训练模块 —— 8 微生物分离、纯化和保藏技术 8 微生物分离、纯化与保藏技术 8.1 微生物菌种的分离纯化 模块二：微生物检验基础技能训练 食品微生物 （1）学习并掌握微生物分离纯化的原理和分离纯化的技术。 （2）学习从样品中分离、纯化出所需菌株。 第一节 微生物菌种的分离纯化 一、实训目的： 微生物分离、纯化与保藏技术 二、实训原理 分离纯化技术是微生物学中重要的基本技术之一。 分离纯化：从混杂的微生物群体中获得单一菌株纯培养的方法。 纯种（纯培养）：一株菌种或一个培养物中所有的细胞或孢子都是由一个细胞分裂、繁殖而产生的后代。 微生物的分离与纯化技术的应用：分离具有特殊功能的微生物、优良菌种及纯化被污染的菌种等。 微生物菌种的分离纯化 三、实验材料 样品： 细菌：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌 放线菌：细黄链霉素 酵母菌：啤酒酵母 霉菌;黑曲霉 培养基：普通琼脂斜面和平板，营养肉汤 仪器与用具：接种环、接种针、试管架、酒精灯、记号笔、标签、火柴、灭菌培养皿、无菌水、菌种等。 微生物菌种的分离纯化 取样 制备稀释液 分离 四、实训方法与步骤 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 微生物菌种的分离纯化 1、倾注平板法 分离： 注意培养基温度，混合均匀 先加菌 微生物