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举例说明黄酮的提取分离方法 组长：崔宁 组员：翟雪 王璐璐 冯子涵 赵子惠 罗春雨 刘红成 提取方法 1.1热水提取法 热水提取法一般仅限于提取苷类. 在提取过程中要考虑加水量、浸泡时间、煎煮时间及煎煮次数等因素. 此工艺成本低、安全,适合于工业化大生产。以水做溶剂,同时提高浸提温度、延长浸提时间和增加液料比(60倍) ,可以明显提高芦丁的产率。 实例 桑叶：采用热水提取法测定桑叶中各有效成分含量，发现黄酮类化合物含量为1%以上,其中霜后桑叶黄酮类化合物含量最高为1.54% ,其次是晚秋桑叶,春季桑芽和后期桑叶含量最低。 甘草：过去甘草黄酮的提取主要为水提法,其主要原理通过甘草粉与水按一定配比,加热混合至80～95 ℃浸提甘草粉,利用甘草黄酮的水溶性进而提取甘草黄酮。此法虽然要求设备简单,但因提取杂质多、提取时间长、提取液存放易腐败变质、后续过滤操作困难、收率较低等缺点,现已不常使用。 1.2有机溶剂萃取法 其原理是利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同,选用不同的溶剂萃取。常用的有机溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等,一般采取乙醇为提取溶剂。高浓度的乙醇(如90 %～95 %) 适于提取苷元,浓度60 %左右的乙醇适于提取苷类。提取次数一般为2～4 次,提取方法有热 回流提取和冷浸提取两种方式。 实例 桑叶：使用乙醇提取桑叶中总黄酮的最佳工艺条件为：乙醇的浓度为70%，料液比为1:15，在80℃的条件下浸泡3h。使用多种有机溶剂提取发现桑叶中黄酮类化合物的最佳提取溶剂是60%丙酮。 西芹：使用无水乙醇为提取剂，按西芹鲜重与提取剂的比例(W/ V) 1∶2 ,在80 ℃下回流提取2～4h ,制备西芹总黄酮。 银杏叶：从银杏叶中提取总黄酮时, 随乙醇浓度的增加总黄酮提取率逐渐上升, 当乙醇浓度增至70% 时提取率最高, 之后反而下降, 故选用70% 的乙醇作浸提剂最佳。 生姜：生姜黄酮提取用40倍原料的90%甲醇溶液, 在60 ~ 65℃ 条件下提取4 h 为其优化组合, 而其试验组合中以用40倍原料的75%甲醇溶液,在60~ 65 ℃ 条件下提取2 h的提取效果最好。 1.3碱性水或碱性稀醇提取法 黄酮类化合物大多具有酚羟基, 易溶于碱水, 酸化后又可沉淀析出。其原因一是由于黄酮酚羟基的酸性, 二是由于黄酮母核在碱性条件下开环, 形成2′-羟基查耳酮, 极性增大而溶解。因此可用碱性水( 碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙水溶液) 或碱性稀醇( 50 %乙醇) 浸出, 浸出液经酸化后析出黄酮类化合物。 实例 菊花：各取5g干菊花4份, ，在80℃恒温水浴分别以pH为8,9,10,11的NaOH溶液分两次温浸1h和0.5h。pH降低时.由于提取不完全.含量较低；pH为11时,虽然黄酮含量较高，但含有的NaOH溶质较多，而造成分析结果出现干扰，因此pH-=10时的提取效果最好。 槐米：槐米粉碎, 加入5倍量的水, 用石灰水调pH 值8~ 9, 加入3% 的硼砂, 抽滤, 反复提取3次。滤液用稀盐酸调pH 值2~ 3, 静置6 h, 析出沉淀, 过滤, 滤渣干燥, 即得粗芦丁, 精制可得精制芦丁, 纯度可达99% 以上。 1.4 微波萃取法 微波萃取技术是物料吸收微波能后通过偶极子旋转和离子传导两种方式同时加热,加剧了体系中分子的碰撞频率,使黄酮分子容易从药材内部扩散到萃取溶剂中,大大缩短了加热时间,提高了萃取效率,尤其适合极性分子的萃取。原理是利用不同组分吸收微波能力的差异, 使基体物质的某些区域或萃取体系中的某些组分被选择性加热, 从而使得被萃取物质从基体或体系中分离, 进入到介电常数较小、微波吸收能力相对较差的萃取剂中, 并达到较高的产率。 实例 桑叶：微波萃取黄酮类成分的最佳工艺条件为: 70%乙醇12倍量,于60℃萃取20 min,其中提取溶剂对结果有显著影响。应用微波萃取法比传统醇提法分别高55%和32%。微波萃取法在提取时间、溶剂用量及得率等方面明显优于传统的醇提法,适于工业生产。 芦篙叶：用芦篙叶为原料提取黄酮类化合物。通过正交试验, 得出最优化提取条件为: 功率200W,时间10min, 料液比1g:25ml,pH 值10。提取次数为2次。在此条件下, 黄酮类化合物得率为2. 53%。并且, 随着料液比的增大, 提取率增大。但到一定程度时, 得率有所降低。可能是大量溶剂水吸收了微波导致提取温度降低的缘故。 藜蒿：利用微波辅助从藜蒿中提取黄酮类化合物的方法以75% 乙醇作为提取溶剂, 密封条件下, 功率200W, 料液比1g:25ml辐射时间20 s/次x3次, 提取率最高。 1.5 超声波提取法 超声波提取是利用超声波空化作用加速植物有效成分浸出的提取。其基本原理是利用超声波的空化作用,破坏植物的细胞,使溶剂易于渗入细胞