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* * 目 录 生物化学与分子生物学实验教学中心 离 心 技 术 Centrifugation techniques 基本概念及原理 离心技术的应用 离心机的构造及使用 洗衣机脱水筒 基本概念 离心技术 借助离心机旋转所产生的离心力，使不同大小和不同密度的物质分离的技术。 超速离心技术 根据物质沉降系数、质量、浮力因子等的不同,应用强大的离心力使物质分离、浓缩、提纯的方法. 基本原理 离心力 Centrifugal force (F) 物体作圆周运动时形成的一种迫使物体脱离圆周运动中心的力。 离心力 F = ma = mω2r ω: 旋转角速度 r: 旋转体离旋转轴的距离 2πn ω= (rad/sec) 60 n：转子每分钟的转数(rpm) 沉降系数S (Svedberg) 单位离心力作用下颗粒沉降的速度. 2.1×102× logX2/X1 S = n2× (t2-t1) X1: 离心前粒子离旋转轴的距离 X2: 离心后粒子离旋转轴的距离 n：转子每分钟的转数(rpm) t2-t1：离心时间（s） S在实际应用时常在10-13秒左右，故把沉降系数10-13秒称为一个Svedberg单位，简写为S，量纲为秒。沉降系数越大，相对分子质量越大 离心机的装置及应用 离心机的种类 一般分常速,高速和超高速离心机 1 常速离心机 5000r/min, 用途：分离细胞、细胞碎片、培养基残渣及粗结晶等较大颗粒 2 高速离心机 5000～20000r/min, 用途：分离各种沉淀物、细胞碎片及较大的细胞器等 3 超高速离心机 20000～60000r/min 结构：离心管帽、冷冻装置和温控系统、真空系统、安全保护系统、制动系统、指示仪表等。 按用途分： 制备用超速离心机： 分离纯化生物大分子、细胞器和病毒等 分析用超速离心机： 测定样品纯度（根据紫外吸收率或折光率等判断）、沉降系数、相对分子量 国产超高速离心机 Beckman超高速离心机 离心方法的选择 对于常速和高速离心机，由于所分离的颗粒大小和密度相差较大，只要选择好离心速度和时间，就能达到分离效果。 超速离心的离心方法： 差速离心 密度梯度离心 速率-区带 等密度梯度离心 1 差速离心 采用不同的离心速度和离心时间，使沉降速度不同的颗粒分批分离的方法。主要用于分离大小和密度差异较大的颗粒。 2 速率-区带离心 样品在密度梯度介质中进行离心，使沉降系数比较接近的物质得以分离的一种区带分离方法。梯度液的最大密度不超过样品组分的密度。 样品铺在密度梯度溶液表面，离心后，由于样品组分的沉降系数不同，运动速率也不同。选择某一特定时刻,当样品组分各区带之间的距离拉得最远时停止离心，即可以达到分离目的。 常用的介质包括甘油和蔗糖。
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