白芨组培技术实验设计方案.docx

探究白芨组织培养的最适培养基白芨为兰科草本球根植物，又名紫兰、连及草、甘根、白给，植株高18-60厘米。白芨的初生假鳞茎是圆球形，生长到一定程度才形成V字形块状假鳞茎。叶4-6枚，狭长圆形或披针形，长8-29厘米，宽1.5-4厘米，先端渐尖，基部收狭成鞘并抱茎。白芨喜凉爽气候及腐殖质丰富而排水良好的砂壤土，半阳地也可栽培，但干旱、高温，会使叶片枯萎黄。3月下旬萌芽，霜后地上枝叶枯萎，白芨的花粉呈块状不易散开，所以在授粉上也不是很有利。白芨的种子极细小，似粉末，状没有胚乳，只有几个细胞构成的发育不完全的胚，种子萌发率极低 ,且自然繁殖困难 ,所以野生资源较稀少 ,是我国的一种珍稀濒危的保护植物。白芨属有九个种类，产于中国的就有四种，白芨在我国长江流域及以南地区均有分布，生长区域较广。由于多年的掠夺式采挖，加上生境日恶化，使得野生白芨的数量急剧减少，濒临灭绝边缘。白芨的主要化学成分是联苄类、菲类及其衍生物,此外,还含有少量挥发油,粘液质,白及甘露聚糖以及淀粉(30.5%),葡萄糖 (1.5%)等。最近几年,对白及的化学成分研究主要集中在联苄类、二氢菲类和联菲类化合物上,并从中分离鉴定出一系列新的联苄、二氢菲和联菲化合物。白芨具有收敛止血、清热解毒、消肿生肌之功效。随着我国中医药事业的发展，白芨在临床上的应用范围不断扩大，白芨的用药需求急剧增加。但白芨种子在自然条件下很难萌发和生长，实生苗的栽培较为困难，仅靠分株繁殖，周期长，繁殖效率低，而且耗种量大，很难满足大量栽培的需要。白芨正面临着资源难以满足市场的严峻现实。本试验采用白芨种子为材料，利用组织培养方法进行无性繁殖，旨在为实现白芨种苗的规模化生产提供快速扩繁技术支持。实验目的:通过不同的基本培养基，不同激素浓度配比、有机物浓度等对白芨组织快繁的影响。筛选得到白芨组织培养的最佳培养基配方,建立白芨组织快繁体系。实验方法：以MS或1/2MS为基本培养基，添加不同浓度的激素，有机添加剂等，观察白芨种子的萌发，增殖，生根情况，找出最佳培养基配方。材料：人工栽培的白芨成熟未开裂蒴果实验用具及药品：超净工作台、高压灭菌锅、光照培养箱、镊子、滤纸、无菌水、乙醇、升汞、MS培养基，1/2MS培养基、萘乙酸（NAA）、细胞分裂素（6-BA）、KT、IBA、土豆、活性炭、蔗糖等。实验步骤：配制培养基(各1L)以下培养基均加入6.8-7.5g/L琼脂粉，Ph5.6- 5．8，高压灭菌锅中l2l℃下灭菌20min。1.种子萌发培养基：标号基础培养基6-BA(mg/l)NAA(mg/l)2,4-D(mg/l)KT(mg/l)IBA(mg/l)活性碳(g/l)土豆（g/l）蔗糖（g/l）1MS1.03021/2MS1.03031/5MS1.0304MS0.11.02405MS0.11.023061/2MS1.00.13071/2MS0.50.13081/2MS0.50.53091/2MS0.50.53010MS1.00.130111/2MS1.00.30.230121/2MS0.10.50.130131/2MS12MS1.040302.增殖培养基：标号基础培养基6-BA(mg/l)NAA(mg/l)2,4-D(mg/l)KT(mg/l)IBA(mg/l)活性碳(g/l)土豆（g/l）蔗糖（g/l）1MS1.00.1302MS1.00.5303MS1.00.51.0304MS1.00.50.53051/2MS1.00.13061/2MS0.51.03071/2MS1.00.51.03081/2MS0.80.32.0309MS0.50.53010MS0.10.53011MS1.00.10.50.50.51.03012MS1.00.10.5303013MS1.00.10.540303.生根培养基：标号基础培养基6-BA(mg/l)NAA(mg/l)2,4-D(mg/l)KT(mg/l)IBA(mg/l)香蕉泥（g/l）活性碳(g/l)番茄汁(g/l)土豆（g/l）蔗糖（g/l）1MS0.11.0402MS0.11.03031/2MS0.11.03041/2MS0.10.53051/2MS0.10.52.03061/2MS0.10.52.0307MS0.50.50.5308MS0.50.50.53091/2MS0.50.340101/2MS0.11.00.52.030111/2MS1.01.01.030121/2MS1.00.50.50.52.030131/2MS0.11.00.50.52.030141/2MS0.11.01.00.50.530151/2MS0.11.002MS0.11.00.520030171/2MS0.11.00.540304.移栽基质配比编号 1234基