食品中组胺的测定.docx

组胺的检测组胺是自体活性物质之一，在体内由组氨酸脱羧基而成，组织中的组胺是以无活性的结合型存在于肥大细胞和嗜碱性粒细胞的颗粒中，以皮肤、支气管粘膜、肠粘膜和神经系统中含量较多。当机体受到理化刺激或发生过敏反应时，可引起这些细胞脱颗粒，导致组胺释放，与组胺受体结合而产生生物效应。抗组胺是拮抗组胺对人体的生物效应，即应用抗组胺药物。 抗组胺受体就是拮抗组胺的H1和H2受体。由于此两种受体在人体内分布不同而产生不同的效应，它是抗组胺药应用治疗疾病的生理药理基础。毒理药物中毒 组胺主要用于胃分泌功能检查，作最大酸分泌(MAO)测定。但目前已被五肽胃泌素取代。组胺通过激活体内组胺H1受体和H2受体，收缩多种平滑肌如气管、支气管和胃肠道平滑肌；但同时松弛小血管平滑肌，增加毛细血管通透性；还能强烈刺激胃酸分泌，减慢房室传导，增加心肌收缩力等。误用大剂量或静脉给药可引起中毒。 　食物中毒 大量检测表明，海产鱼中的青皮红肉鱼类含组胺较高，当鱼不新鲜或腐败时，鱼体中游离的组胺酸经/view/3851633.htm脱羧酶作用产生组胺. 组胺中毒潜伏期一般为0.5~1小时，最短可为5min,最长达4h.检测方法1．分光光度法1 主要仪器和试剂721型分光光度计组胺标准溶液：取经95℃干燥2．5小时的磷酸组织胺分析纯试剂配制成含20ug·ml 的组胺标准溶液。0．2 对氨基苯磺酸溶液(简称甲液)1oNNaNO 溶液(简祢乙液)，现配现用。所用水均为二次蒸馏水。2 组胺测定方法及条件试验2．1 测定方法：在25ml容量瓶中，移入一定量的组胺标准溶液，依次加入0-2 甲液、0．4%HCI、10%乙液和2．0%NaCO 溶液，用水稀释至刻度，摇匀。于25℃室温下放置20分钟，用试剂空白为参比，测其吸光度值。2．2 吸收光谱：取2．0ml组胺标准溶液，按上述方法显色，以水为参比，分别测定显色化合物和试剂空白的吸收光谱。图1表明显色化合物在506nm 处有一最大吸收，本实验取506nm 作为吸收波长。2．3 显色条件试验 ．2．3．1 Na CO 用量对显色反应的影响：试验结果如图2(a)所示：该显色反应必须在碱性溶液中才能进行，此时在碱性介质中组胺与重氮酸盐起偶联反应。2．3．2 HC1用量对显色反应的影响：图2(b)表明随着HCI用量增加，进行重氯化反应的程度也随之加快 当HC1加入量在0．5～1．0ml之间，吸收达最大值。2．高效液相色谱法1 材料与方法1． 1 仪器与试剂美国 Biorad 700 高效液相色谱仪，1706 UV 紫外检测器，分析天平，恒温水浴箱，均质机，离心机，0． 45 μm 针头微孔滤膜过滤器等。组胺标准品由广东省疾病预防控制中心提供，纯度 ＞99%。氨水( 25%) 、碳酸氢钠、高氯酸、氢氧化钠、丹酰氯均为分析纯，甲醇、丙酮和乙腈均为色谱纯，实验用水均为双蒸水，并经 Milli － Q 超纯处理。溶液配制: 称取一定量的组胺标准品，用 0． 4mol / L 高氯酸配制成浓度为 1 mg / mL 的组胺标准溶液，放于冰箱中4 ℃保存，一周一配。精确称取适量丹磺酰氯，用丙酮溶解并配制成浓度为 10 mg/mL的溶液，经过 0． 45 μm 针头微孔滤膜过滤器过滤后，4 ℃冰箱中保存，备用。1． 2 样品采集与处理于广州市某大型超市购买具有相近生产日期、不同品牌的大豆发酵酱油、豆酱各三种，盒装及散装豆豉各一种，酸奶六种，啤酒( 易拉罐装) 五种。豆豉和豆酱分别取出适量，于研钵中捣碎、混匀，酸奶和酱油摇匀。准确称取 2． 0 g 豆豉或豆酱样品( 酸奶 5． 0 g，酱油 2． 0 mL) ，置于 15 mL 离心管中，加入10 mL 0． 4 mol / L 高氯酸，用均质机捣碎、混匀，在3000 r / min 的条件下离心 10 min; 取出上层清液，再次加入 10 mL 0． 4 mol/L 高氯酸，充分混匀，在3000 r / min 的条件下离心 10 min; 取出上层清液，合并两次清液并过滤，用 0． 4 mol/L 的高氯酸定容到25 mL。取啤酒样品 20 mL 于小烧杯，室温超声脱气20 min。准确量取 5 mL 于 15 mL 离心管中，加入2． 5 g 氯化钠，振荡使之溶解并达到饱和，再加入3 mL 正丁醇 － 氯仿 ( 体积比 50 ∶ 50) 溶液，加盖旋紧，充分振荡 10 min，于 3000 r/min 条件下离心10 min，取上层清液 2 mL 于离心管中，于 40 ℃ 水浴条件下氮气吹干后，再加入0． 1 mol/L 盐酸0． 5 mL。1． 3 柱前衍生取样品提取液 0． 25 mL，加入 25 μL 2 mol/L 的氢氧化钠调节 pH 值，加入 75 μL 饱和碳酸氢钠溶液和0． 5