滤膜法测定粪大肠菌群.doc

滤膜法测定粪大肠菌群 37.1.1 主题内容与适用范围 ????本方法规定了生活饮用水中粪大肠菌群的滤膜测定方法。 ????本方法适用于生活饮用水和低浊度的水源水中粪大肠菌群数的测定。 37.1.2 方法提要 ????用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤水样，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴在MFC培养基上，经44.5℃培养后，计数典型菌落。 ????37.1.3 培养基与试剂 ????37.1.3.1 MFC培养基 ????37.1.3.1.1 成份 ????A 胰胨 10g ????B 多胨 5g ????C 酵母浸膏 3g ????D 氯化钠 5g ????E 乳糖 12.5g ????F 胆盐3号(Bile salt No.3) ????或混合胆盐 1.5g ????G 琼脂 15g ????H 苯胺蓝 0.2g ????I 蒸馏水 1000mL ????37.1.3.1.2 制法: 在1000mL蒸馏水中先加入玫红酸(10g/L)的氢氧化钠溶液[C(NaOH)＝0.2mol/L] 10mL，混合后，取500mL加入琼脂煮沸溶解，于另外500mL 蒸馏水中，加入除苯胺蓝以外的其他试剂，加热溶解，倒入已溶解的琼脂，混匀后调pH为7.4，加入苯胺蓝煮沸，迅速离开热源，待冷却至60℃左右，制成平板， 不可高压灭菌。 制好的培养基应存放于2～10℃，不超过96h。 ????本培养基也可不加琼脂，制成液体培养基，使用时加2mL于灭菌吸收垫上， 再将滤膜置于培养垫上培养。 ????37.1.3.2 EC培养基 ????37.1.3.2.1 成份 ????A 胰蛋白胨 20g ????B 乳糖 5g 37.1.1 主题内容与适用范围 ????本方法规定了生活饮用水中粪大肠菌群的滤膜测定方法。 ????本方法适用于生活饮用水和低浊度的水源水中粪大肠菌群数的测定。 37.1.2 方法提要 ????用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤水样，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴在MFC培养基上，经44.5℃培养后，计数典型菌落。 ????37.1.3 培养基与试剂 ????37.1.3.1 MFC培养基 ????37.1.3.1.1 成份 ????A 胰胨 10g ????B 多胨 5g ????C 酵母浸膏 3g ????D 氯化钠 5g ????E 乳糖 12.5g ????F 胆盐3号(Bile salt No.3) ????或混合胆盐 1.5g ????G 琼脂 15g ????H 苯胺蓝 0.2g ????I 蒸馏水 1000mL ????37.1.3.1.2 制法: 在1000mL蒸馏水中先加入玫红酸(10g/L)的氢氧化钠溶液[C(NaOH)＝0.2mol/L] 10mL，混合后，取500mL加入琼脂煮沸溶解，于另外500mL 蒸馏水中，加入除苯胺蓝以外的其他试剂，加热溶解，倒入已溶解的琼脂，混匀后调pH为7.4，加入苯胺蓝煮沸，迅速离开热源，待冷却至60℃左右，制成平板， 不可高压灭菌。 制好的培养基应存放于2～10℃，不超过96h。 ????本培养基也可不加琼脂，制成液体培养基，使用时加2mL于灭菌吸收垫上， 再将滤膜置于培养垫上培养。 ????37.1.3.2 EC培养基 ????37.1.3.2.1 成份 ????A 胰蛋白胨 20g ????B 乳糖 5g ????C 3号胆盐或混合胆盐 1.5g ????D 磷酸氢二钾 4g ????E 磷酸二氢钾 1.5g ????F 氯化钠 5g ????G 蒸馏水 1000mL ????37.1.3.2.2 制法: 将上述成份溶解于蒸馏水中， 分装到带有倒管的试管中， 115℃高压灭菌20min，最终pH为6.9±0.2。 37.1.4 仪器 ????37.1.4.1 隔水式恒温培养箱或恒温水浴。 ????37.1.4.2 塑料培养皿: 60mm×15mm或50mm×12mm。 ????37.1.4.3 其他仪器同总大肠菌群滤膜法(36.1.4)。 37.1.5 检验步骤 ????37.1.5.1 准备工作 ????37.1.5.1.1 滤膜灭菌: 将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌三次，每次15min。前两次煮沸后需更换水洗涤2～3次，以除去残留溶剂。 ????37.1.5.1.2 滤器灭菌: 用点燃的酒精棉球，火焰灭菌。也可用121℃高压灭菌20min。 ????37.1.5.2 过滤水样 ????用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，帖放在已灭菌的滤床上、，固定好滤器，将100mL水浴(如水样含菌数较多，可减少过滤水样量，或将水