公共场所内公用毛巾细菌总数、大肠杆菌的测定.docx

公共场所内公用毛巾细菌总数的测定 一．方法：涂 抹 法1. 仪器高压蒸汽灭菌器。干热灭菌箱。培养箱:36 C士1,C ,冰箱。电炉。天平。灭菌平皿:直径9 cm.灭菌刻度吸管:1 mL,10 raL,灭菌棉拭子。灭菌剪刀。放大镜。PH 计或精密PH 试纸。2培养基和试剂生理盐水成分:氯化钠8.5 g；燕 馏 水 10 00 m L制法:将氯化钠(8.5 g )溶解于蒸馏水(1 000 mL)中，分装到试管内，每管10 mL,121℃20 min；高压灭菌。（2）营养琼脂3检验程序 4操作步骤4-1 采样方法4.1.1 随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾4.1.2 用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在毛巾、枕巾对折后两面的中央各25 cm2(5 cm×5 cm)面积范围内有顺序地来回涂抹，用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分，将棉拭子放人10 mL生理盐水内，4h内送检。4.2检验方法4. 2-1 将放有棉拭子的试管充分振播。此液为1:10稀释液。4.2.2 以无菌操作，吸取2 mL检样，分别注入到两块灭菌平皿内，每皿1 mL。如污染严重，可十倍递增稀释，即吸取1 mL加到9 mL灭菌生理盐水中，混匀，此液为1：1OO稀释液。每个稀释度做两块平皿。4.2.3将已融化冷至45℃左右的营养琼脂培养基倾人平皿，每皿约15 mL，并立即旋摇平皿。冷凝后放36℃土1℃培养箱培养48h。5菌落计数方法 作平皿菌落计数时，可用肉眼直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏，在记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落，该平皿不宜计数；若片状菌不到平皿中的一半，而其余一半中菌落分布均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘以2，所得结果代表全皿菌落数。公用毛巾、床上卧具细菌总数按公式(1)计算：m=k*n/2m---细菌总数，cfu/25 cm^2k—稀释倍数n—平均菌落数6菌落数报告方式9.1 选择平均菌落数在30 300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告(见表1中例1).9.2 若有两个稀释度，其平均菌落数均在30^300之间，则由两菌落总数之比值来决定，若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于2，则报告其中稀释度较低的平皿菌落数(见表1中例2、例3),9.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘VA稀释倍数报告之(见表1中例4)09.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例5),9.5 若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间，其中一个稀释度平均菌落数大于300，而相邻的另一个稀释度平均菌落数小于30，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例6)09.6 若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每毫升小于1 cfu(见表1中例7),9.7 菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告之，大于10。时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五人法计算。为了缩短数字后面零的个数，可用10的指数来表示(见表1中报告方式栏)。在报告菌落数为“不可计”时，应注明样品的稀释度。例次 不同稀释度的平均菌落数 10-110-2 10-3两个稀释度菌落数之比 菌落总数（个/毫升） 报告方式 （个/毫升） 1 1,365 164 2—16，40016,000或1.6×104 2 2,760 295 461.6 37, 750 38,000或3.8×104 3 2,890 271 602.2 27，100 27,100或2.7×104 4无法计数4,650 513 — 51，3000 510,000或5.1×105 5 27 11 5 —270270或2.7×102 6无法计数305 12 — 30，50031,000或3.1×104 公共场所内公用毛巾大肠菌群的测定一．纸片法1.仪器高压蒸汽灭菌器。干热灭菌箱。培养箱：36℃±1℃。冰箱。电炉。天平。灭菌平皿：直径9cm。灭菌刻度吸管：1mL,10mL。灭菌棉拭子。灭菌剪刀。PH计或精密PH试纸。2.培养基和试剂1.乳糖胆盐发酵培养液1.1成分：蛋白胨20g猪胆盐（或牛、羊胆盐）5g乳糖10g0.04%溴甲酚紫水溶液 25ml蒸馏水 1000ml1.2制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于蒸馏水中，调pH值至7.4，加溴甲酚紫溶液，混匀，分装到带有倒管的试管中，每管10ml，在115℃高压灭菌15分钟。（注：双