3烟草中农残检测技术LC-MSMS汇编.ppt

烟草及烟草制品 多种农药残留量的测定 LC-MS/MS 国家烟草质量监督检验中心 (一）、LC-MS/MS简介 （二）、方法原理 (三）、适用农药 （四）、检测流程 （五）、检测中常见问题 主要内容 LC-MS/MS简介 以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统。样品在液相色谱部分分离，经质谱离子化，质量分析器将离子碎片按质量数分开，经检测器得到质谱图。 色谱和质谱优势结合，应用广泛。 适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析。 适于复杂基质样品,特别是农产品，生物样品中的农兽药残留的定性定量分析。 利于多组分分析。 LC-MS/MS简介 实验原理 粉碎后的干燥样品在调节含水量之后使用乙腈振荡提取，然后用无水硫酸镁和氯化钠振荡促使其分层；采用PSA（primary secondary amine）吸附剂去除提取液色素、脂肪酸等实现净化，用高效液相色谱-串接质谱仪实现检测，内标法定量。 适用农药 A、有机磷类 安硫磷、毒虫畏、毒死蜱、二嗪磷、乐果、灭线磷、苯线磷、氧乐果、倍硫磷、马拉硫磷、久效磷、甲拌磷、伏杀硫磷、辛硫磷、甲基嘧啶磷、杀虫畏、敌百虫、蚜灭磷、磷胺 B、氨基甲酸酯类 涕灭威、甲萘威、克百威、丁硫克百威、甲硫威、灭多威、 杀线威、抗蚜威、残杀威、硫双威 C、杀菌剂 腈菌唑、霜霉威、氟吗啉、霜脲氰、咪鲜胺和咪鲜胺锰盐、阿拉酸式苯-S-甲酸、苯霜灵、多菌灵、甲基硫菌灵、噁霉灵、稻瘟灵、苯菌灵、噁唑菌酮、烯酰吗啉、戊菌唑、恶霜灵、三唑醇、三唑酮 D、除草剂 异噁草松、双苯酰草胺、吡氟禾草灵、喹禾灵、克草敌、敌草胺、甲草胺、异丙甲草胺 E、其它杀虫剂 啶虫脒、除虫脲、吡虫啉、吡蚜酮、噻虫嗪 常见检出的农药 杀菌剂：腈菌唑、霜霉威、甲霜灵、苯霜灵、多菌灵、甲基硫菌灵、稻瘟灵、烯酰吗啉、恶霜灵、三唑醇、三唑酮、异菌脲 除草剂：甲草胺、二甲戊灵、异噁草松 其它杀虫剂：啶虫脒、吡虫啉 测定条件 步骤 时间（min） 流速（μL/min） 水 （%） 乙腈 （%） 0 0.00 200 90 10 1 1.00 200 50 50 2 5.00 200 50 50 3 16.00 200 40 60 4 25.00 200 20 80 5 30.00 200 5 95 6 40.00 200 5 95 7 40.01 200 90 10 8 45.00 200 90 10 液相色谱条件 ——色谱柱： C18液相色谱分析柱 (柱长 150 mm ，内径 2.1 mm ， 固定相粒径3 μm) 或相当者； ——柱温：25 ℃； ——进样量：10 μL； 推荐：Atlantis@dC18 3μm 质谱条件 ——扫描方式：正离子扫描/负离子扫描； ——监测方式：多反应监测； ——电喷雾电压：5500 V； ——雾化气压力：0.414 MPa； ——离子源温度：500 ℃； 测定条件 检测流程 样本采集 测定 制备 净化 确证 提取 前处理过程 内标： 磷酸三苯酯 Rp——以干基计的农药残留量，单位为毫克每千克（mg/kg） cr——从基质混合标准工作曲线上得到的被测组分在试样萃 取液中的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V——提取步骤提取剂乙腈的使用体积，单位为毫升（mL）； m——样品质量，单位为克（g）； w——样品的水分含量，%（质量分数）。 计算公式 不同稀释倍数基质标准曲线响应强度变化 基质混合标准工作曲线的制作 标准工作溶液 分别移取混合标准储备液 1000μL、 500 μL、250 μL、100 μL 及50 μL到5个10 mL容量瓶中，加入100 μL内标工作液，用乙腈定容。 空白样品提取液+标准工作溶液+乙腈 空白样品 提取及净化 空白样品提取液 基质混合标准工作溶液 LC-MS/MS分析 相对等浓度标准溶液的响应强度（~1ppb） 不同基质对信号的影响 需要注意的问题 样品含水率对于萃取乃至回收率影响很大 调整样品含水率，2g样品添加10mL水 基质效应基本上引起响应信号的下降 不同基质的影响趋势一致，但幅度有差别 相同基质对不同目标物的影响差别很大 基质标准曲线的应用，结合内标 稀释有助于减小基质效应，但效果有限 适当稀释 需要注意的问题 灵敏度低检查步骤 ? 若FIA正常，则再继续接上色谱柱采样，判断是色谱柱问题还是流动相问题。 ? 样品本身的问题，如样品没有完全溶解，浓度不够，所用溶剂与流动相不匹 配等。 ? 样品存贮时间过长，保存条件不好，分解或吸附了。 ? 放在自动进样器中的样品小瓶内套管底部有气泡，没取到样品，或针头位置 太高