分子生物学电子教案第四章分析报告.doc

第四章 DNA的复制 第四章 DNA复制? (DNA? Replication) 1．主要内容1)?DNA复制概览2)?细菌DNA复制3)?真核DNA复制2．教学要求1)?掌握原核生物和真核生物DNA的复制特点2)?熟悉原核生物和真核生物DNA复制的酶系统 第一节 DNA复制概述第二节 DNA复制的酶学 第三节 原核生物DNA复制第四节 真核生物DNA复制?第一节 DNA复制概述 (DNA Replication: An Overview) 一、基本概念二、DNA的半保留复制三、复制起点、方式和方向四、DNA复制的半不连续性 一、基本概念?复制子(Replicon，复制单位或复制元)(? DNA中含有一定复制起点和复制终点的复制单位。 1.3万— 90万不等?? A unit of the genome in which DNA? contain? a region from origin to terminator ?复制体(Replisome)：复制叉处的许多酶和蛋白组成的复合体，协同动作合成DNA。(?The multi( protein (30±) structure that assembles at replicating fork to undertake synthesis of DNA二、DNA的半保留复制（Semi-Conservation Replication）??????? CsCl (Cesium chloride) density gradient ultracentrifugation（ CsCl密度梯度超离心）?Labeled E.Coli DNA with 15N? 14N(?? 三、复制起点、方向和方式??All prokaryotic chromosomes and many bacteriophage and viral DNA molecules are circles and comprise single replications. （单复制子）1、复制起点（origin，ori 或 O，复制原点）复制开始处DNA分子的特定位置原核生物（Prokaryote）：单复制起点，即——整个染色体只有一个复制单位真核生物（Eukaryote）： 多复制起点，即－－一个genome中有多个复制单位 ?? 2、复制方向（复制过程的顺序性）复制叉（Replication? fork）：染色体中参与复制的活性区域，即复制正在发生的位点复制眼（replication? eye）：电子显微镜下观察正在复制的DNA，复制的区域形如一只眼睛真核生物的多复制子?? 多个复制眼（1）单双向复制取决于起点处有一个还是两个复制叉（2） 复制的多模式 单起点、单方向（原核）多起点、单方向（真核）单起点、双方向(原核)多起点、双方向（真核） ?3、复制方式（1） 从新起始（ de novo initiation ）或复制叉式（ replication fork ）（2） 置换式（ Displacement form）又称 D 环复制 （3）共价延伸方式（covalence elongation）或滚环式复制（rolling? circle replication） DNA复制方式?（1）从新起始（ de novo initiation ）或复制叉式（ replication fork ）或θ 复制?A replication eye forms a theta structure in circular DNA.( （2） 置换式? Displacement? form ，又称 D 环复制 ? 线粒体和叶绿体 DNA的复制方式（3）共价延伸方式（covalence elongation）或滚环式复制（rolling? circle replication）由于复制时产生的滚环结构形状象σ，又称σ复制病毒、细菌因子 四、DNA复制的半不连续性（Semi-Discontinuous Replication） 复制方向的问题：? 冈崎片段（Okazaki? fragment） ?1968年冈崎（Reiji Okazaki）设计了两组实验，其一是脉冲标记实验（pilse－labeling experiment）。冈崎利用T4噬菌体侵染E.cili(t-)菌株，并分别用dTTP(3H-T)进行2’’，7’’,15’’,30’’,60’’,120’’的脉冲标记，分离提取T4噬菌体DNA，变性后，进行Cscl密度梯度离心，以检测具放射性的沉降片断，判断片断大小。结果表明经不同标记时间的，被3H-T标记的新合成的DNA片段几乎都