分子生物学复习题及(适合硕士生)分析报告.doc

复习题 1.简述与糖尿病发病有关基因的改变 Ⅱ型糖尿病—基因：包括胰岛素基因、胰岛素受体基因、葡萄糖激酶基因和线粒体基因损伤。糖尿病就是一种基因病。 胰岛素基因共有5个位点改变可导致变异胰岛素合成引起糖尿病 IDSR受体遗传性缺陷时、发生严重胰岛素抵抗、影响了受体的生物合成和生化性状。 GK基因的突变大多数为错义突变、使分子氨基酸序列改变、降低酶的活性 保持体内血糖平衡的通路之一是周围组织对葡萄糖的非氧化性摄取，即向糖原合成的转化、糖原合酶（GSY)起着重要作用。该通路的损害、可引起周围组织对胰岛素的抵抗、常伴有高血压和明显的家族遗传倾向。 线粒体核苷酸3243位由Ａ突变为Ｇ，就会引发“线粒体基因突变糖尿病”。 2. 肾素血管紧张素对高血压的影响？ 肾素-血管紧张素系统（RAS）由肾素、血管紧张素原、血管紧张素转化酶、血管紧张素及其相应的受体构成。肾素激活从肝脏产生的血管紧张素原，生成血管紧张素Ⅰ，然后经肺循环的转化酶（ACE）生成血管紧张素Ⅱ。作用于血管紧张素Ⅱ受体，使小动脉平滑肌收缩，刺激肾上腺皮质球状带分泌醛固酮，通过交感神经未梢突触前膜的正反馈使去甲肾上腺素分泌增加，从而导致血压升高。 3.简述AD发病的基因的变化与疾病的关系 β淀粉样前体蛋白(APP)基因 APP为一跨膜糖蛋白，结构类似于细胞表面受体。APP合成后、由β淀粉样前体蛋白裂解酶(BACE) 裂解为可溶性Aβ、裂解大多数在糖基化修饰之后。Aβ是一种β折叠的可溶性异质的多肽。基因突变或其他因素可以导致APP氨基酸序列或裂解部位的改变、从而产生易于沉淀的Aβ。沉淀的Aβ聚合物对神经元具有毒性作用、可导致神经元的退行性病变。按照基因结构改变的类型，突变可分为碱基置换、移码、缺失和插入4种。按照遗传信息的改变方式，突变又可分为错义、无义两类。1.碱基置换：某位点一对碱基改变造成的。2.移码突变：某位点添加或减少1-2对碱基造成的。3.缺失突变：基因内部缺失某个DNA小段造成的。4.插入突变：基因内部增添一小段外源DNA造成的。根据基因突变对机体影响的程度，可分为下列几种情况： 1．变异后果轻微，对机体不产生可察觉的效应。从进化观点看，这种突变称为中性突变。 2．造成正常人体生物化学组成的遗传学差异，这样差异一般对人体并无影响。 3．可能给个体的生育能力和生存带来一定的好处。 4．产生遗传易感性5．引起遗传性疾病，导致个体生育能力降低和寿命缩短，这包括基因突变致蛋白质异常的分子病及遗传酶病。6．致死突变，造成死胎、自然流产或出生后夭折等在功能上，抑癌基因起负调控作用，而原癌基因起正调控作用。 在遗传方式上，原癌基因是显性的，而抑癌基因在细胞水平上是隐性的。 在突变发生的细胞类型上，抑癌基因突变可以发生在体细胞中，也可能发生在生殖细胞中，并通过生殖细胞得到遗传，原癌基因突变只发生在体细胞中。等位基因上，癌基因只要有一个等位基因发生突变时就可以引起癌变，而抑癌基因只要有一个等位基因是野生型时，就可以抑制癌变。载体是指可以携带目的基因进入宿主细胞的运载工具。 条件：1）具有自主复制能力 2）容易分离3）具有二个以上的遗传标记物，便于重组体的鉴定与筛选4）分子量小，以容纳较大外源DNA的插入5）具有克隆位点，常具有多个单一酶切位点，称为多克隆位点6）具有较高的遗传稳定性。 质粒结构特征 1. PBR322 ：1）含有两个抗生素抗性基因（氨卞青霉素基因，四环素基因）；2）具有较小分子量，容易纯化；3）具有较高的拷贝数；4）复制起始点，保证高拷贝自我复制。 2. PUC：1）复制起始点；2）有氨卞青霉素基因，但它的核苷酸序列发生变化，不含酶切位点，丧失四环素抗性基因；3）含有半乳糖苷酶基因的启动子及其编码的a-肽链DNA序列，同称为LacZ基因；4）有多克隆位点。目的基因的获取载体的构建目的基因与载体的连接成重组体重组体导入宿主细胞进行扩增克隆基因的筛选和鉴定概念：目的基因是指待应用或待研究的特定基因，亦可称为供体基因。 获取方法：1直接从染色体中分离2 化学合成法3用反转录酶合成cDNA 4基因组文库和cDNA文库中筛选获得5聚合酶链反应基本原理： 基本原理是以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5`末端互补的寡核苷酸片段为引物，dNTP为原料、在TaqDNA聚合酶作用下，按照半保留复制的机制经变性、退火和延伸重复过程（沿着模板链合成目的DNA），使目的DNA片段扩增。 反应步骤： ① 变性 待扩增的DNA模板在反应体系中加热变性、双链DNA变性成两条单链、95℃。 ②退火 降低温度、使引物与两条单链模板DNA发生退火作用、并结合在靶DNA区段两端的互补序列位置上、 55~60℃。 ③延伸 反应体系温度升高，在TaqDNA聚合酶