十五章第二节20160419分析报告.ppt

主要疫苗和菌苗的制造工艺 1、HBV 2、制造方法 HBV感染现状 乙型肝炎由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV) 引起，是危害全球人类健康的疾病。由HBV引起的肝硬化及原发性肝癌每年可导致100一200万人死亡。 WHO 统计结果显示,全球大约有20亿人感染HBV，其中4亿人为慢性感染。在中高度流行区,成年人携带乙肝病毒的比率为2 一15 %，约感染的比率为30一100 %。 我国是乙型肝炎的高发区，普通人群中携带率约为10 %，感染率高达50一75 %。 乙肝疫苗生产方法 1、血源性疫苗 2、重组蛋白疫苗 3、多肽疫苗 4、核酸疫苗 1、血源性疫苗 1980年WHO提出了从人体血浆制备乙肝疫苗的生产和控制规程。 从乙肝病毒表带面抗原携者的血浆中提取HBsAg，纯化灭活后制成。这种疫苗具有较强的免疫原性，但还存在一定的问题: (1) 从乙肝病毒携带者血浆中提取的22nm颗粒灭活不彻底，会造成感染; (2) 病人不愿意贡献血液，造成疫苗来源受限，价格高居不下; 2、基因重组疫苗 ⑴ HBsAg编码基因插入适当载体,在酵母、哺乳动物细胞中表达,分离纯化表达产物而制备的疫苗。 （免疫原性优于血源性疫苗,以酵母细胞作为表达系统,生产成本低） 乙肝病毒制备 IFN 1、概念 2、分类 3、临床上常用的干扰素有哪些 4、干扰素制备 IFN Def：干扰素（Interferon）：由干扰素诱生剂诱导有关生物细胞 所产生的一类高活性，多功能的诱生蛋白。 2、人干扰素分类 ⑴ IFN-α 14个基因编码13种IFNs，每种IFN有不同抗病毒活性和抗增殖活性； IFN-α1对B细胞瘤有较大的抗增殖活性， IFN-α2对其它肿瘤更特异；IFN-α1对人细胞的抗病毒活性低于IFN-α2 世界范围内用于抗肿瘤的IFN IFN-α1、 IFN-α2 ⑵ 融合的IFN IFN-α1前61 AA和IFN-α2的后104 AA发生融合，对鼠细胞表皮具有抗病毒活性； IFN-α1前91 AA与IFN-α4的后72 AA融合，没有抗病毒活性，提高小鼠的抗肿瘤活性； 3、PEG化的IFN IFN-α1在体内的半衰期是4-8h, 40KDaPEG- IFNα2a上，40KDa- IFNα2b比单独IFN表现出预期改善的药理效果。 上市重组干扰素: α2a、α2b、α1b、 β1b，γ； 1992年我国第一个基因工程药物IFN-α1b获得国家一类新药证书。 研发中的重组干扰素：IFN ω，临床阶段 ⑴ 体外诱生干扰素制备工艺： Sendai病毒诱导人白细胞 1989年，IFNα-n3/Alferon，批准上市 1 g IFNα，需要 3亿ml人血白细胞 来源困难，产量低，价格昂贵 潜在的血源性病毒污染的可能性 ⑵ 人源转化细胞系培养生产工艺： 1999年：IFNα-n1/Wellferon, 批准用于临床。 优点：首次实现大规模商业化生产。 缺点：活性低，产量低，潜在的病毒污染。 上市产品：rhuIFN β-1a 1996，Avonex (Biogen)；2002，Rebif (Serono) 产物：166 aa 糖基化蛋白，22.5 kD 特点：成本高，过程严格；分泌表达，产量低。 宿主：腐生型假单胞杆菌（Pseudomonas putida） 上市产品：IFN α-2b/安福隆 产物：无糖基化可溶性蛋白质，具有天然分子结构和生物活性 工艺特点：发酵周期短：无需变性、复性过程。 ①构建表达IFNα-2b的假单胞杆菌工程菌 ③ 精制IFNα-2b 阴离子交换层析与浓缩 0.01M磷酸缓冲液（pH8.0）平衡树脂。 盐浓度线性梯度洗脱。 结合SDS收集干扰素峰。 除杂：10 kD超滤膜，0.05M醋酸缓冲液（pH5.0）中透析。 阳离子交换层析与浓缩 平衡树脂：0.1M醋酸缓冲液（pH 5.0）平衡树脂。 冲洗：上样，相同缓冲液冲洗。 洗脱：盐浓度线性梯度洗脱 检测：结合SDS收集干扰素峰。 除去杂质：10 kD超滤膜。 凝胶过滤层析 洗涤液：0.15 M NaCl-0.01M磷酸缓冲液（pH7.0）清洗系统和树脂 洗脱：上样，相同缓冲液进行洗脱。 合并干扰素部分 胰岛素 定义：胰岛素是由胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸等的刺激而分泌的一种蛋白质激素。是机体内唯一降低血糖、促进糖原、脂肪、蛋白质合成的激素。适用于1型糖尿病和2型糖尿病晚期病人的治疗 Ins的性质 1、Mw: 5807D pI:5.3～5.35 2、溶解度：PH 4.5 - 6.5的范围内，几乎不溶于水，易溶于稀酸和稀碱溶液，在﹤80 %的乙醇中也可以溶解。 3、在溶液中的状态