微生物限度方法适应性试验方案..doc

XXXXXXXXXXX有限公司 胶囊用明胶微生物限度检查方法适用性试验方案 文件编号：YZF-QC-001-01 起草人： （QC） 年 月 日 审核人： （QA） 年 月 日 批准人： （质量负责人） 年 月 日 目 录 １.验证目的 ２.验证原理 ３.验证人员 ４.相关文件 ５.验证内容 ６.验证周期 7.验证综合结论 　 1. 验证目的 建立微生物限度检查方法适用性试验验证，通过验证确认检测所采用的方法适合于本公司所用原料胶囊用明胶的微生物限度的测定。 验证原理 通过试验数据结果，比较实验组中试验菌的恢复生长结果来评价整个验证方法的准确性、有效性和重现性。 验证人员 职位 姓名 负责内容 QC检验员 负责验证方案的起草和实施，并对所测数据准确性负责。 QC负责人 负责验证方案的审核及按照规定的取样计划对标准检验操作程序的准确执行，负责组织实施。 QA负责人 负责验证实施过程中的监督检查，取样，确保结果的可靠性。 审核人 负责验证方案及报告的审核和批准。 4. 相关文件 《中国药典》2015版四部《通则1105、通则1106》 5. 验证内容 通过验证以确认所采用的方法适合于该产品需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定；确认所采用的方法适合于该产品控制菌的检查。根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，就按验证的方法和条件进行药品的微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。 5.1微生物计数法验证 当建立产品的微生物限度检查时，应进行需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定。验证试验可与供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数同时进行。 5.1.1验证用菌种 枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501（第一代） 金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003（第一代） 铜绿假单胞菌CMCC（B）44102（第一代） 白色念珠菌CMCC（F）98001（第一代） 黑曲霉CMCC（F）98003（第一代） 5.1.2验证依据：中国药典2015版四部 5.1.3验证步骤 5.1.3.1菌液制备 5.1.3.1.1分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，经30~35℃培养18~24小时后，分别取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的肉汤培养物0.9%无菌氯化钠溶液1ml+9ml 0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-6~10-7，细菌数为不大于100cuf/ml，做活菌计数备用。 5.1.3.1.2接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基中，经20~25℃培养2到3天后，取1~2环白色念珠菌斜面培养物加入9ml 0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-4~10-7，菌液为不大于100 cfu/ml，做活菌计数备用。 5.1.3.1.3接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基中，经20~25℃培养5~7天后，取黑曲霉斜面培养物，加3~5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液将孢子洗脱，吸出孢子悬液1ml+9ml 0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-4，菌液为不大于100cuf/ml，做活菌计数备用。 5.1.3.2 阴性对照 为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验。 5.1.3.3 计数方法适用性试验 5.1.3.3.1供试液制备 取供试品10g，加45℃ PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，振摇，放置45℃水浴保温使其完全溶解，摇匀，作为1:10供试液，备用。 5.1.3.3.2试验组： 取1:10的供试液加入试验菌，使1ml供试液中含菌量不大于100cfu。注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。 5.1.3.3.3菌液组： 取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液同试验组操作。测定所加的试验菌数。 5.1.3.3.