微生物限度检查操作规程..docx

微生物限度检查操作规程目的建立微生物限度检查操作规程，规范操作以保证结果的准确性。范围适用于成品、原辅料、包材及纯化水的检验。职责质检部负责制定本规程，质检部微生物限度检查人员负责本规程的具体实施。工作程序4.1微生物计数法微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物标准时，应按规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。另外，本方法不适于活菌制剂的检查。本试验应在洁净工作台高效层流保护下进行。4.1.1计数方法计数方法包括平皿法、薄膜过滤法供试品检查时，应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，检测的样品量应能保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。所选方法的适用性须经确认。4.1.2计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验菌种及菌液制备菌种 试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验用菌株见表1。菌液制备 按表1 规定程序培养各试验菌株。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加入3?5ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0. 9%无菌氣化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2?8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2?8℃,在验证过的贮存期内使用。阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。培养基适用性检査微生物计数用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。按表1 规定，接种不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，置表1 规定条件下培养。每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5?2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。表1 试验菌液的制备和使用试验菌株试验菌液的制备计数培养基适用性检查计数方法适用性试验需氧菌总数计数霉菌和酵母菌总数计数需氧菌总数计数霉菌和酵母菌总数计数金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B)26 003〕胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基，培养温度30?35℃，培养时间18?24小时胰酪大豆胨琼脂培养基和胰酪大豆胨液体培养基，培养温度30?35℃,培养时间不超过3天，接种量不大于100cfu。胰酪大豆胨琼脂培养基，培养温度30?3 5℃,培养时间不超过3天，接种量不大于100cfu铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)〔CMCC(B)10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)〔CMCC(B)63 501〕白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F)98 001〕沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基，培养温度20?25℃，培养时间2?3天胰酪大豆胨琼脂培养基，培养温度30?35℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu.沙氏葡萄糖琼脂培养基，培养温度20?25℃,培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu胰酪大豆胨琼脂培养基，培养温度30?35℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu沙氏葡萄糖琼脂培养基，培养温度20?25℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu黑曲霉（Aspergillusniger)〔CMCC(F)98 003〕沙氏葡萄糖琼脂培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基，培养温度20?2 5℃，培养时间5?7天，或直到获得丰富的孢子胰酪大豆胨琼脂培养基，培养温度30?35℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu.沙氏葡萄糖琼脂培养基，培养温度20?25℃,培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu胰酪大豆胨琼脂培养基，培养温度30?35℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu沙氏葡萄糖琼脂培养基，培养温度20?25℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu注：当需用玫瑰红钠