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(四)实验室诊断1Dipstick方法:目前世界卫生组织推荐应用Dipstick方法其原理是利用恶性疟原虫能够合成分泌一种稳定的水溶性抗原-富组蛋白Ⅱ(histidine rich proteinⅡHRPⅡ)以其制备的单克隆抗体滴于免疫层析条上经过吸附洗涤与显色检测血中富组蛋白Ⅱ的存在据国外比较Dip-stick及其他几种方法的报道Dipstick方法诊断疟疾的敏感性(842%~939%)和特异性(811%~995%)均较高;且具有操作简便快速稳定易学的特点适用于镜检或实验室技术质量难以保证及待确定疟疾的流行范围疟疾呈低度传播需避免药物滥用以减少抗性发展的地区必须指出的是应用Dipstick方法也有一定的局限性用此法难以检出尚处于潜伏期或血中仅含有成熟配子体的恶性疟原虫2PCR检测:目前公认在各种疟疾检测方法中PCR方法的敏感性和特异性是最高的为进一步提高PCR技术的敏感性和特异性以及便于在实际工作中推广在此基础上又进行了巢式PCR(nested PCR)PCR-ELISA等方法的研究除能够直接检测抗凝血样中的疟原虫外PCR检测滤纸干血滴上的疟原虫技术也已成熟从而便于以PCR技术监测边远地区的疟疾由于它对实验技术和条件的要求较高从而限制了其在现场的应用就目前多数疟区的条件现场采血后尚要回到具有较好条件的实验室做进一步的分析处理3免疫学检测:①检测疟原虫抗原;可查出原虫血症者故对临床诊断为现症病人以及从人群中查传染源考核疗效均可使用主要方法有琼脂糖扩散试验对流免疫电泳酶联免疫吸附试验直接荧光或酶免疫染色法等;②检测疟原虫抗体:可用于流行病学调查追溯传染源;借助测定流行区人群抗体水平的高低来推断疟疾的流行趋势;过筛供血者以预防疟疾输血感染以及考核抗疟措施的效果等此外对多次发作又未查明原因者检测疟疾抗体有助于诊断检测抗体的方法较常用的有间接荧光抗体试验间接血凝试验酶联免疫吸附试验等4核酸探针检测:目前国内外已有几种不同的核酸探针用于疟原虫的检测由于其独特的高特异性敏感性可高于镜检认为核酸探针技术非常有希望替代常规的显微镜检查且可在短时间内批理处理大量样本已被认为可以定量及估算疟原虫血症水平是疟疾流行病学调查及评价抗疟措施效果很有潜力的诊断工具目前大量生产核酸探针和大规模现场使用尚存在一些技术问题须解决5血中病原体检查:人体四种疟原虫只有恶性疟一种在周围血内仅见环状体和配子体且在发作期检出机会较多发作间歇期多数原虫进入内脏毛细血管如当时配子体尚未出现则血检可能暂呈阴性因此恶性疟在发作期间查血最为适宜;其余三种疟疾的血检不受时间限制无论在发作期及间歇期均可见到原虫临床上酷似疟疾血检原虫阴性者应坚持一天查血2次连续几天细致地按规定检查厚血膜其功率高于薄血膜很多倍凡是疟疾最终定能在周围血中查到疟原虫从患者耳垂或指尖刺取血液涂片染色镜检迄今仍是最可靠的确诊疟疾方法如发现红内期疟原虫即可确诊鉴于镜检法的准确性受到血中原虫密度制片和染色技术服药后原虫变形或密度下降以及镜检经验等因素的影响近年来对传统的血检法有了一些改进其一为Becton Dickinson公司QBC法(quantitative buffy coat)用含有抗凝剂和吖啶橙的毛细管取病人60μl血加一个浮器离心后疟原虫浓集在红细胞上层和白细胞下层由于管中央有浮器存在把上述两层细胞和疟原虫推向管壁可以直接在荧光显微镜下检查发荧光的疟原虫此法有浓缩作用可提高敏感度不需要染色节省了时间其二是0.5%~1.0%皂素溶液代替普通水溶血然后以吉氏液染色后镜检优点是以皂素处理过的厚血膜底板清晰无红细胞残骸和血小板干扰有助于疟原虫检出疟疾是一种严重危害人体健康的寄生虫病,建国初期称为五大寄生虫病之一。寄生于人体的疟原虫共有四种,即间日疟原虫[Plasmodium vivax(Grassi and Feletti,1890 Labbe,1899)],三日疟原虫[P.Malariae(Laveran,1881 Grassi and Fetti,1890],恶性疟原虫[P.Falciparum(Welch,1897)Schaudinn,1902]和卵形疟原虫[P.Ovale(Graig,1900)Stephens,1922]。在我国主要是间日疟原虫和恶性疟原虫;其他二种少见,近年偶见国外输入的一些病例。诊断病原学检查:从患者周围血液中检出疟原虫,是疟疾确诊的依据。应用间接免疫荧光法检测特异性疟原虫抗体,已在流行病学调查中使用。近年来发展的新方法,如用单克隆抗体检测病人血中的疟原虫抗原,DNA探针检测疟原虫的核酸,或PCR法扩增少量疟原虫的DNA,以提高检出率等均取得一定的成绩。治疗措施疟疾治疗不仅是解除患者的疾苦,同时也是为了控制传染源、防止传播。现症病人要及时发现,及时根治。间日疟采用氯喹和伯喹(氯伯)
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