（精）肠道细菌实验.ppt

第四次实验课内容 1、细菌代谢产物检查（示教） 2、肠道杆菌在选择鉴别培养基的生长情况 （示教） SS平板、双糖铁培养基 3、肥达试验（结果示教） 实验一 细菌代谢产物检查 细菌具有不同的代谢酶系统，因此对营养物质的利用与分解能力也各不相同，可形成不同的中间代谢产物与终末代谢产物。根据细菌的代谢能力及其产物不同鉴别细菌，称为细菌的生化反应。本实验通过介绍常用生化反应的经典试验方法，以了解细菌生化反应的机制与实验原理。 细菌菌落的色素观察 金黄色葡萄球菌：产生只局限于菌落的脂溶性金黄色色素。 铜绿假单胞菌：产生带荧光的水溶性色素，该色素可扩散至菌落周围，使培养基呈亮绿色。 细菌菌落的溶血现象观察 乙型溶血性链球菌:透明的无色溶血环。 基本原理 酸的产生可利用指示剂来断定。在配制培养基时预先加入溴甲酚紫[Ph5.2（黄色）-6.8（紫色）]，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。 气体的产生可由发酵管中倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。 四、操作步骤 1、编号 用记号笔在各试管上分别标明发酵培养基名称和所接种的菌名。 2、接种 取盛有葡萄糖发酵培养基的试管3支，分别接种大肠杆菌、痢疾杆菌、乙型副伤寒杆菌。另取乳糖发酵培养基试管3支，分别接种这三种细菌。 3．将上述已接种的葡萄糖和乳糖发酵试管和对照管置37℃温室中培养24小时。 观察结果: 观察结果时，看各管颜色变化及杜氏小管有无气泡。 产酸产气用“⊕”表示； 只产酸不产气用“+”表示； 不产酸也不产气用“—”表示。 肥达试验（Widal test） 材料 伤寒沙门菌O、H菌液，甲型副伤寒沙门菌H菌液和乙型副伤寒沙门菌H菌液。 生理盐水和患者血清（1:20稀释），微量反应板，1ml吸管，52℃水浴箱 方法 取4×6孔反应板，孔横向4排，纵列6列，依次编号。 于第2、3、4、5、6列每孔内加入生理盐水0.2ml。 于第1、2列在每孔内加入稀释度为1：20的受检血清0.2ml ，从第2列开始进行倍比稀释。 每排加入诊断菌液0.2ml 轻轻振荡混匀后，水浴箱孵育2小时 效价的判定 [参考值]??? 伤寒杆菌凝集价H1：160，O1：80；??? 副伤寒凝集价A1：80，B1：80， C1：80 [临床意义]机体感染伤寒、副伤寒杆菌后会产生相应抗体，正常人因隐性感染或预防接种，血清中可含有一定量的抗体。一般当H≥1：160，O≥1：80，副伤寒凝集价≥1：80时，才有诊断意义。病程中应每周复查一次，如病人H与O的凝集价均高于参考值或较原凝集价升高4倍以上，则患伤寒的可能性很大。若H凝集价高而O低于正常值，则可能是以往预防接种疫苗的结果或非特异性回忆反应所致。 O抗原 沙门菌属间有交叉反应 IgM H抗原 种特异性 -- 伤寒沙门菌 IgG 甲型副伤寒沙门菌 乙型副伤寒沙门菌 O与H抗体的诊断意义 O抗体：IgM H抗体：IgG 一般认为O抗体效价在1：80以上，H抗体效价在1：160以上，有辅助诊断意义。但在分析结果时，应注意以下两点：（1）非肠热症患者，由于曾接种过伤寒，副伤寒疫苗或以往在流行区有过隐性感染或患过伤寒，副伤寒，以及回忆反应等原因，也可呈现阳性结果。不过，由这些原因所引起的阳性反应主要是H抗体升高，O抗体效价一般不高，同时，每隔5~7天试血一次，其抗体效价一般不会随病程而升高。上述这些都有别于现症感染。 （2）少数肠热症患者，由于发病初期曾使用大量抗生素，或机体有免疫缺陷病，或机机反应性极弱等原因，抗体效价可以很低，甚至为阴性结果。 因此不能只根据肥达氏试验的结果去作简单肯定或否定的结论，必须结合当地流行情况，既往接触史，以及临床症状和体征，作出正确的判断。 － － － － 6 阴性对照 1:40 1:40 1:160 1:320 效价判定 1:640 1:320 1:160 1:80 1:40 － － － － － PB抗原 － － － － － PA抗原 + + ++ +++ ++++ O抗原 + ++ ++ +++ ++++ H抗原 5 4 3 2 1 结果观察 ++++ 清澈透明，菌体形成凝块于管底 +++ 较透明，大部分菌体形成凝块于管底 ++ 稍浑浊，较多细小凝集 + 较浑浊，有细小凝集 － 浑浊，无