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关于免疫检测技术的研究 2008级生物技术 200806044015 向鹏英 指导教师 袁万安 （重庆文理学院 生命科学与技术学院 重庆402168） 摘要：本文介绍了免疫检测新技术以及它们的应用，说明了现代免疫检测技术在人们的生产、生活中占有比较重要的地位。值得大家关注和广泛推广。 关键词：免疫检测技术；检测；应用 Research on immunoassays XIANG Peng-ying Instructor YUAN Wan-an (College of Life Science and Technology,Chongqing Univerity of Art and Sciences, Chongqing 402168,China) Abstrct: This paper introduces the new technology of the immunization and their applications. And illustrates that the technology of the immunization plays a important role in human`s life and production. It is worth people`s attention and popularization. Keywords:immune detection technology;detection;application 免疫学技术与现代物理、化学技术相结合产生很多新型的免疫检测技术。主要有SPA免疫检测技术、生物素-亲和素免疫检测技术、胶体金免疫检测技术、免疫电镜技术、免疫传印技术、免疫沉淀、PCR-ELISA、化学发光免疫测定、免疫传感器等。 免疫检测技术的种类 SPA免疫检测技术 SPA是葡萄球菌蛋白A的简称，是金黄色球菌细胞壁的表面蛋白。它具有能与多种动物IgG的Fc片段相结合的特性，因而成为免疫检测技术的一种极为有用的试剂。 SPA免疫检测技术的特性 SPA的分子量为12~15ku，为多肽链，内含3个高度相似的IgG Fc片段结合区，每区由50个以上的氨基酸组成。SPA的等电点为pH5.1，其天然结构十分稳定。 SPA具有和人及许多动物如豚鼠、猪、小鼠、兔、猴等的IgG结合的能力，与大多数禽类IgG不结合。 SPA在免疫检测技术的应用 （1）SPA放射免疫分析 在固相放射免疫分析中，可利用125I-SPA代替标记的抗抗体。此法灵敏度高，可检测出ng/mL的抗体含量，需时短，重复性好。同样也可以建立检测抗原的SPA放射免疫分析。 （2）SPA免疫酶标记技术 用HRP-SPA代替免疫酶组化染色间接法中的酶标抗抗体，具有染色时间短、灵敏性高和背景染色浅等优点。在ELISA和Dot-ELISA中，也可用HRP-SPA代替酶标抗抗体。 （3）SPA荧光检测技术 可用异硫氰酸荧光素标记纯化的SPA，以代替免疫荧光抗体染色间接法中的荧光素标记的抗抗体。 （4）协同凝集试验 利用葡萄球菌蛋白A与IgG类抗体Fc片段结合的特性，使葡萄球菌成为结合了特异性抗体的致敏颗粒，通过凝集反应，对细菌、病毒等进行定型和鉴定。 （5）免疫球蛋白的制备和分析 SPA可作为一种比较理想的提纯和分析免疫球蛋白的制剂。 1.2 生物素-亲和素免疫检测技术 利用生物素与亲和素专一性结合以及生物素、亲和素既可以标记抗原或抗体，又可被标记物所标记的特性，可建立生物素-亲和素系统来显示抗原抗体特异性反应的各种免疫检测技术。 1.2.1 生物素与亲和素的特性 （1）生物素 生物素（biotion）是一种广泛分布于动、植物组织的生长因子，亦称辅酶R或维生素H，尤以蛋黄、肝、肾组织中含量较高。利用生物素的羧基加以化学修饰后，可以制成各种活性基团的衍生物，亦称活化生物素。 （2）亲和素 亲和素（avidin）是一种存在于鸡蛋清中的碱性糖蛋白，分子质量为68ku，等电点为pH10.5，纯品呈白色粉末，易溶于水。对热的耐受性较强，经80℃温度作用2min仍保持活性。 1.2.2 亲和素-生物素系统免疫检测技术类型 （1）亲和素-生物素-过氧化酶技术（ABC法） 该技术是利用亲和素分别连接生物素标记的第2抗体的生物素标记的酶。可应用于以下两个方面： a 组织切片和细胞悬液中抗原的检测 b 在免疫电镜中的应用 （2）桥亲和素-生物素技术（BRAB） 此技术是利用生物素分别标记抗体和酶，然后以亲和素为桥，把两者连接起来。 （3）标记生物素-亲和素技术（LAB） 该技术是以生物素标记抗体作第1抗体，酶标记亲和素作第2抗体。 （4）生物素-亲和素或链霉亲和素ELISA检测技术 包括B