ApoE基因的检测方法例析.ppt

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2017-01-05 发布于湖北
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ApoE基因的检测方法例析.ppt

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ApoE的检测方法测序 ARMS-PCR PCR-SSCP PCR-RFLP Q-PCR * 112 158 cys cys cys arg arg ε2 ε3 ε4 TGC，cys CGC，arg codon：112/158 TGC TGC TGC CGC CGC arg CGC E2(T/T) E3(T/C) E4(C/C) E2(T/T) E2/E2(TT/TT) E2/E3(TT/TC) E2/E4(TC/TC) E3(T/C) E3/E3(TT/CC) E3/E4(TC/CC) E4(C/C) E4/E4(CC/CC) T/C T/C 112 158 T C C T P1 P2 P3 P4 5 3 上游引物 P5 下游引物 A管：P1、P3、P5 B管：P2、P4、P5 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 11、22、33、44、55、66分别代表基因型 E2/E2、 E2/E3 、E2/E4 、E3/E3 、E3/E4 、E4/E4 ARMS-PCR PCR-SSCP 单链构象多态性(SSCP) 是在非变性聚丙烯酰胺凝胶上，根据短的单链DNA 或RNA 分子碱基序列不同形成的不同构象；一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变, 形成多态性。 E2/E2：A,A1 E2/E3：A,A1,B,B1 E2/E4：A,A1,C,C1 E3/E3：B,B1 E3/E4：B,B1,C,C1 E4/E4：C,C1 PCR-RFLP GCGC CGCG A B C D E E2： ····T····T··· 片段A E3： ····T····C··· 片段E、D E4： ····C····C··· 片段B、C、D 112位：···GT/CGC···· 158位：···GC/TGC···· E2/E2：A E2/E3：A,D,E E2/E4：A,B,C,D E3/E3：E,D E3/E4：B,C,D,E E4/E4：B,C,D Q-PCR F R probe probe TT TC CC TT E2/E2(TT/TT) E2/E3(TT/TC) E2/E4(TC/TC) TC --- E3/E3(TT/CC) E3/E4(TC/CC) CC --- --- E4/E4(CC/CC) Roche SNP Genotyping Introduction 融解曲线分析的原理融解曲线分析的结果判读单色荧光对ApoE分型 *