浙江大学分子笔记考试重点概论.doc

第2讲 生物大分子和中心法则 1.DNA变性后对紫外线（260nm）吸收增强 2.同裂酶（isoschizomer）：来源不同但识别相同靶序列的限制性内切酶 同尾酶（isocaudomer）：来源不同，产生相同的黏性末端，但识别序列不相同的限制性内切酶 3.限制性内切酶不能识别特定位点甲基化的DNA，从而防止自身DNA的降解 4.什么是Cot1/2：Cot1/2 is the product of concentration and time required for 50% reassociation given in nucleotide-moles × second/liter. 5.高重复序列的Cot1/2低重复序列的Cot1/2单拷贝序列的Cot1/2 6.载体的必要条件：①复制子②标记基因③多克隆位点 7.载体的类型：质粒、噬菌体、粘粒（cosmid）、人工染色体（PAC、BAC、YAC） 8.一些工具酶 种类 功能 碱性磷酸酶 除去位于DNA链5’末端的磷酸基团 末端转移酶 在双链核酸的3’末端随机加上多聚单核苷酸 多聚核苷酸激酶 使多聚核苷酸5’末端磷酸化 RNaseH 降解DNA-RNA杂交链中的RNA链 第3讲 分子生物学实验方法 1.琼脂糖浓度越高，电泳分辨率越高，可用于分离小分子DNA 2.SDS的分辨率 琼脂糖凝胶电泳的分辨率 3. PFGE（pulsed-field gel electrophoresis，脉冲场凝胶电泳）用于分离大分子量的DNA； 原因：①当DNA分子量较大时，其分子量的对数与迁移率不成正比 ②大分子量的DNA易断裂 4.做Northern Blot的时候需要一个对照，一般用管家基因 5.分子生物学实验方法： ①凝胶电泳：PFGE（pulsed-field gel electrophoresis，脉冲场凝胶电泳）、PAGE (聚丙烯酰胺凝胶电泳)、 Two-dimensional gel electrophoresis双向凝胶电泳） ②层析：Ion-exchange chromatography（IEC, 离子交换层析）、Gel- filtration chromatography凝胶过滤层析） affinity chromatography ③Labeled tracers（标记示踪）Autoradiography（放射性自显影）、Phosphorimaging磷屏成像）、Nonradioactive tracers ④检测蛋白质与DNA的相互作用：EMSA （Electromobility Shift Assays，凝胶迁移滞后分析 ⑤检测两种蛋白的相互作用：酵母双杂交、Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) ⑥核酸杂交：Northern blot、Southern blot ⑦Mapping transcripts、Nuclear Run-on transcription转录活性测定)、Reporter gene transcription、RFLP(restriction fragment length polymorphism)、DNA fingerprinting、In situ-hybridization、DNA sequencing、Automated DNA sequencing、Restriction Mapping、Site-directed mutagenesis定点突变技术) 7. 细菌质粒命名：①用小写字母p表示质粒②在其后面用几个大写字母表示质粒的性质或实验室名称或构建发现此质粒的作者③在大写字母后面用数字编号④其他：Δ表示缺失，∷表示DNA插入，Φ表示蛋白质融合，’表示融合时发生了缺失，如lacZ’则表示lacZ基因的3’部分发生缺失 基因和蛋白质的表示方式：①正常基因：大写斜体②突变基因：小写斜体③蛋白质：大写正体④抗性基因：第一个字母大写，并加上“+”或“r”表示有抗性，加上“-”则表示敏感。如：Ampliciliin（氨苄青霉素），抗性标记为Ampr ⑤质粒：正体大写，前面加正体小写p⑥启动子：基因前加斜体小写p 第4讲 DNA复制 1.DNA复制所需要的酶（或蛋白）及功能 酶的种类 功能 酶的种类 ①Helicase 使DNA解链 ④Topoisomerase ②SSBP（Single-Strand DNA-Binding protein） 阻止已分开的DNA单链重新结合、防止单链DNA降解 ⑤DNA polymerase ③DNA ligase ⑥Primase 2.拓扑异构酶的作用：为了DNA复制而解开DNA双链复制区的双螺旋结构，从而导致其它区域产