取样方法验证微生物.doc

起草人 起草日期 审核人 审核日期 批准人 批准日期 生效日期 验证小组会签 姓名 部门 职务或岗位 签字时间 拷贝号： 变更记载 变更原因及目的 修订号 批准日期 生效日期 颁发部门 分发部门 及份数 生产技术管理部[1] 综合制剂车间[1] 质量管理部[2] 微生物棉签擦拭取样方法验证方案 主题内容 本方案规定了微生物棉签擦拭取样验证的目的、原理、标准及内容。 适用范围 本方案适用微生物棉签擦拭法取样。 责任人 质量管理部现场监控员：负责棉签擦拭取样方法验证方案的起草及实施。 质量管理部QC：负责按计划完成相关检验任务，确保检验结论正确可靠。 质量管理部QA：负责监督验证实施的全过程。 验证管理员：协助验证方案的起草，组织协调验证工作，并总结验证结果，出具验证报告。 质量管理部部长：负责验证方案及验证报告的审核。 总经理：负责验证方案及验证报告的批准。 组长：质量管理部部长 验证小组成员：质量管理部副部长 QC主管 微生物限度检验员 现场监控员 内容 4.1 概述 制药企业生产设备、生产场所、用具等需要清洁，清洁后残留物限度经检验应符合要求。检验残留物限度的方法有两种：一是最终淋洗水取样；二是擦拭取样。擦拭取样优点是能对最难清洁部位直接取样，通过考察有代表性的最难清洁部位的残留物限度评价生产设备的清洁状况。但取样方法需验证其可行性。因此需通过取样方法验证确定清洁方法的有效性。能消除药品交叉污染及微生物污染。 4.2 验证目的 通过对清洗消毒后微生物取样方法的回收率实验，评价取样方法的有效性、代表性和科学性，并为证明清洁方法有效性提供基本依据。 4.3 验证原理 通过物理的擦拭对那些已经干燥的残留物取样。通过选择适当的擦拭溶剂、擦拭工具和擦拭方法，可将清洗过程中未溶解的，已“干结”在设备表面或溶解度很小的物质擦拭下来。检验结果能直接反映出个取样点的清洁状况。 4.4 清洁方法执行《XX机清洁SOP》、《房间清洁SOP》。 4.5 验证方法 4.5.1.试验器具包括不锈钢载片（规格50mm×50mm）、培养皿Ф90mm、医用棉签，以上器具均需要经过121℃、30分钟灭菌后使用。 4.5.1.1.金黄色葡萄球菌菌液的制备 接种金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26 003新鲜培养物至营养肉汤或营养琼脂培养基中，30-35℃培养18-24小时。取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液做10倍系列稀释制成每0.1ml含菌数50-100CFU的工作菌液，并采用营养琼脂培养基计数。 4.5.1.2.白色念珠菌菌液的制备 接种白色念珠菌［CMCC(F)98 001］新鲜培养物至改良马丁或改良马丁琼脂培养基中，23-28℃培养24-48小时。取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液做10倍系列稀释制成每0.1ml含菌数50-100CFU的工作菌液，并采用改良马丁琼脂培养基计数。 4.5.1.3.染菌不锈钢载片制备 ·载片脱脂处理：载片放在含肥皂的水中煮沸30分钟，以纯化水洗净；用纯化水煮沸10分钟；用纯化水漂洗至PH中性晾干备用。 ·菌液滴染 将经灭菌的不锈钢载片平铺于无菌平皿内，滴加金黄色葡萄球菌、白色念珠菌含菌量为50-100CFU的菌液0.1ml，并均匀涂布于整个载体表面。滴染菌液后，载片置洁净工作台晾干备用。每种菌平行制备2个染菌不锈钢载片。 4.5.1.4.擦拭取样 ·取无菌医用棉签2支，用0.9%无菌氯化钠溶液润湿后，在锥形瓶上挤压除去多余的溶液。将其中1支棉签头按在染菌载片上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面，擦拭路线按下图所示，擦拭过程应覆盖整个表面。另取1支棉签再次对该不锈钢载片表面擦拭，擦拭路线和上次擦拭路线垂直。擦拭完后，用无菌手术刀把棉签的头部（棉花部位）剪断，投入装有50ml0.9%无菌氯化钠溶液的锥形瓶中，密闭。共制备12份检品。 ·取适宜稀释的菌液0.1ml（约50-100CFU）分别注入平皿中，立即倾入冷却至45℃左右的培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，测定所涂布的试验菌数。 4.5.1.5.检验 将装有样品的锥形瓶反复振摇，使面前上的微生物释放到溶液中。取样品溶液50ml薄膜过滤，取出滤膜，菌面朝上，贴于培养基上。金黄色葡萄球菌用营养琼脂培养基，白色念珠菌用改良马丁琼脂培养基。 4.5.1.6培养及计数 检验结束后，将细菌平皿倒置于30-35℃培养箱培养3天，霉菌平皿倒置于23-28℃培养箱培养5天，计数。 4.5.2可接受标准：阴性对照应无菌生长，总回收率不低于70%，RSD≤20%。 4.6 检验结果：见检验记录。