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微量加样器 1、微量加样器的使用原理及分类 （1）分类：根据其加样的物理学原理，可分为空气垫加样器 (又称活塞冲程); 无空气垫的活塞正移动加样器，这两种加样器具有不同的特定应用范围。 （2）使用原理： ①活塞冲程(空气垫)加样器可很方便地用于固定或可调:体积液体的加样， 加样体积的范围在小于 1ul ～ 10 ml 之间加样器中的空气垫的作用是将吸于塑料吸头内的液体样本与加样器内的活塞分隔开来， 空气垫通过加样器活塞的弹簧样运动而移动， 进而带动吸头中的液体， 死体积和移液吸头中高度的增加决定了加样中这种空气垫的膨胀程度 因此， 活塞移动的体积必须比所希望吸取的体积要大约 2% ～ 4%， 温度 气压和空气湿度的影响必须通过对空气垫加样器进行结构上的改良而降低， 使得在正常情况下不至于影响加样的准确度 一次性吸头是本加样系统的一个重要组成部分， 其形状 材料特性及加样器的吻合程度均对加样的准确度有很大的影响 以活塞正移动为原理的加样器和分配器与空气垫加样器所受物理因素的影响不同， 因此， 在空气垫加样器难以应用的情况下， 活塞正移动加样器可以应用， 如具有高蒸汽压的 高黏稠度以及密度大于 2. 0 g /cm3的液体;又如在临床聚合酶链反应(PCR)测定中， 为防止气溶胶的产生， 最好使用活塞正移动加样器 活塞正移动加样器的吸头与空气垫加样器吸头有所不同 2、定期对微量加样器的校准 新购的微量加样器的失准率为 1.56﹪,使用 10 000次以下的微量加样器的失准率为 4.00%使用 10 000~ 50 000次以 上的微量加样器的失准率为 8.82 %, 使用 50 000~ 100 000次以上的微量加样器的失准率为 21.7%,使用 500 000次以上的微量加样器的失准率为 47.6%,可见, 无论是新购还是使用过的加样器失准率都较高, 必须定期进行校准。常用的方法有高铁氰化钾法、水称重法、 水银称重法等, 前两种方法准确性较差, 后一种方法虽然优于前两种, 但操作麻烦, 需一定的设备, 且水银容易蒸发, 对人体有害。在实验教学中我们一般常用光电比色法进行校准。具体方法是, 取 3只试管分别加入蒸馏水 5.0 m , l用校正过的血红蛋白吸管吸 0.3 % 曙红液 20ul混匀, 作为标准管, 在 721分光光度计上, 波长 508 nm, 蒸馏水校零,平行3管测定,对吸光度均值, 测定管除用待校正的微量加样器代替血红蛋白吸管外, 其它操作同前。计算: 实际容量 (ul) = A测 /A标X200相对误差 (% ) = (实际容量 - 刻度容量 /刻度容量 ) X100 %相对误差 1%可用吸取关键性溶液: 相对误差为 1% ~3 %可用于吸取一般性溶液: 相对误差 3 % 则应送检定所重新检定方可使用。 3、影响因素： 一般来说， 为防止所吸取体积上出现误差， 有一些基本的操作原则必须遵守 对吸取体积误差影响的因素主要有三个方面: 流体静压; 吸头润湿; 流体动力学 当样本体积从毫升范围降低至微升范围时， 物理作用力的关系即发生变化， 对于加样来说， 其意味着液体表面的作用力效应与其体积或质量(例如重力)的作用力效应相比有所增加， 因此， 加样器生产厂家在设计和构建加样器和吸头中必须仔细考虑这种情况， 而且在使用时也必须注意 流体静压:在吸取液体时， 加样器吸头只能浸入液体几毫升以确保与排出液体时相同的流体静压条件， 因此， 加样器必须以几乎垂直的方式加取液体， 因为倾斜的方式将减少液体柱的高度， 导致吸取的液体过多 如果加样器以 30℃下以垂直方式吸取液体， 可吸取至0. 15%更多的液体 吸头润湿:当吸头排空时， 仍会有一些残留的液体以薄膜的形式保留在吸头的侧面， 其量取决于液体和吸头表面的相互作用， 因此， 其是一个常数， 但依液体材料的不同而不同对于水溶液， 这种润湿影响在构建加样器时就应考虑 对于蛋白液等黏度高的液体， 建议在加样前吸液体数次， 以保证加样的一致性 流体动力学:对体积吸取的第三个影响是从加样器吸头外壁液体的释放， 在此过程中， 吸头的几何形状起一个关键的作用 为确保加样中的稳定条件， 加样器吸头应靠在管壁上，于吸头中释放 如果吸头安装不正确或使用不相配的吸头，相对加样误差将达到0. 4%以上 4、加样器 5、设定容量 6、P型移液器的应用范围 7、微量移液器（micropipettor）的使用说明 1）设定取液值：转动移液器的调节旋钮，反时针方向转动旋钮，可提高设定取液量。顺时针方向转动旋钮，可降低取液量。在调整旋钮时，不要用力过猛，并应注意使移液器显示的数值不应超过其可调范围。2）吸液： [1] 选择吸头(Tip) 放在移液器套筒上，稍加压力使之与套筒之间无空