[性病实验室梅毒SOP.doc

山东省皮肤病医院性病实验室 操作手册 文件名称 梅毒螺旋体检测标准操作规程 编 码 页 数 实施日期 制 订 人 审 核 人 批准人 制订日期 审核日期 批准日期 目 的：规范的梅毒螺旋体检验操作，确保检测结果准确。 适用范围：性病实验室工作人员 责 任 人：实验操作者 1、标本的采集与处理 1.1标本采集的基本要求 1.1.1操作应规范化。 1.1.2所有标本都应当被视为具有传染性，医务人员应戴手套谨慎操作。 1.2梅毒标本采集 梅毒的实验室诊断主要有病原体检测和血清学检测方法，各期梅毒的检测方法及部位见下表。 临床表现 取材部位 检查方法 一期梅毒 溃疡、淋巴结、血液 暗视野检查、血清学检查 二期梅毒 皮损、淋巴结、血液 暗视野检查、血清学检查 潜伏梅毒 血液 血清学检查 三期梅毒 血液、脑脊液 血清学检查 神经梅毒 血液、脑脊液 血清学检查 1.2.1血液 1.2.1.1血清标本 根据需要，用一次性真空采血针与促凝采血管抽取静脉血2-5 ml，室温静置1-2小时（或37℃静置30分钟），待血液凝固、血块收缩后，3000r/min离心10-15分钟，分离新鲜血清，备用。也可采用保存于2-8℃或-20℃的血清。溶血、脂血或污染的标本可影响试验结果。 1.2.1.2血浆标本 根据需要，用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血2-5 ml，轻轻颠倒混匀8-10次，3000r/min离心10-15分钟，分离血浆，备用。血库血浆以及EDTA抗凝血浆同样可以用于梅毒血清学实验（一般仅用于RPR实验，），但易出现假阳性反应（需用血清复试），如用其他抗凝剂应首先评价后再用。 1.2.1.3末梢全血 消毒局部皮肤（成人和1岁以上儿童可选择手指或耳垂，1岁以下儿童采用足跟部）。一次性采血针刺破皮肤，用无菌棉签擦掉第一滴血。收集滴出的血液，立即用于检测。 1.2.2皮损部位组织液 1.2.2.1用于病原学检查 用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，取渗出液与预先滴加在载玻片上的生理盐水混合后加盖玻片立即用于暗视野显微镜检测，或取渗出液直接涂片，用于镀银染色试验。 1.2.2.2用于核酸检测 用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，刮取渗出液，加入有DNA保存液（1ml/管）的标本管中，备用。 1.2.3淋巴液 无菌操作下穿刺腹股沟淋巴结，注入0.3ml无菌生理盐水并反复抽吸2-3次，取少量的淋巴液直接滴于载玻片上，加盖玻片后立即进行暗视野镜检或备用。 1.2.4脑脊液 操作由专业人员进行，一般用腰椎穿刺术获得。患者侧卧于硬板床，两手抱膝紧贴腹部，头向前胸屈曲，使躯干呈弓形，以髂后上棘连线与后正中线的交点为穿刺点，相当于第3-4腰椎棘突间隙，消毒处理后，用2%利多卡因自皮肤到椎间韧带作局部麻醉。术者用左手固定穿刺皮肤，右手持穿刺针以垂直背部方向缓缓刺入，针尖稍斜向头部，成人进针深度约4-6cm，儿童约2-4cm。当针头穿过韧带与硬脑膜时，有阻力突然消失落空感，此时可将针芯慢慢抽出，即可见脑脊液流出，至于合适的容器中，备用。 1.3标本接收的标准 1.3.1核对样品与运送单，检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒并做记录。 1.3.2检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、脂血以及黄疸等情况。如果样品污染或者认为样品不能被接受，应将样品安全废弃。并将样品情况立即通知运送机构。 1.3.3对不合要求的标本，可以拒绝接受。 2、梅毒的实验室检查 2.1梅毒螺旋体暗视野显微镜检查 2.1.1原理 梅毒螺旋体侵入人体后，在皮肤黏膜下增殖，并很快沿着淋巴管到达附近淋巴结，经过2-4周的潜伏期，在侵入部位发生炎症反应，称为硬下疳，数天到1周后，淋巴结肿大。二期梅毒是梅毒螺旋体由局部经淋巴结进入血液，在人体内大量播散后而出现的全身表现，一般发生在感染后的7-10周或硬下疳出现后6-24周，主要为皮肤黏膜损害，有扁平疣、黏膜斑和玫瑰斑疹等。患梅毒的孕妇可以通过胎盘使胎儿受染。研究证明，在妊娠期7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘。其梅毒患者硬下疳、淋巴结、皮肤黏膜损害以及孕妇羊水中均可检查到梅毒螺旋体。将标本置于暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上，可使梅毒螺旋体折射出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。 2.1.2方法 2.1.2.1仪器耗材： 暗视野显微镜 无菌纱布 不锈钢刮刀 灭菌棉拭子 载玻片、盖玻片 注射器，注射针头 灭菌生理盐水 2.1.2.2检测流程 将待检标本制成生理盐水涂片，加盖玻片后立即备检。 在预先调整好的暗视野显微镜的聚光器上加数滴浸油