[抗结肠癌中草药活性成分的分离纯化及其作用机理的研究.doc

一、抗结肠癌中草药活性成分的分离纯化及其作用机理的研究 二、线虫Haemonchus contortus脂肪酸结合蛋白的研究 【摘要】：恶性肿瘤是威胁人类健康和导致死亡的主要原因之一,在过去的10年间,全球癌症发病率增长了22%,并呈逐年上升的趋势。由于目前对于大多数恶性肿瘤来说还没有根治的方法,因此恶性肿瘤仍将继续威胁人类的健康。结肠癌是消化道中最常见的恶性肿瘤之一,是仅次于肺癌的第四大杀手。目前临床上主要采用手术治疗、放疗和化疗来治疗晚期结肠癌病人,但是放疗或化疗毒副作用太大,驱邪伤正,不仅能杀伤肿瘤细胞,也能大量杀伤正常细胞,从而产生严重的副作用导致治疗失败,具有明显的局限性。这就迫使人们继续去寻找毒性低、副作用小的抗癌药物,而中国传统中草药中丰富的天然产物则是重要的筛选来源。目前应用的抗肿瘤活性药物多数是由来源于中药或植物药的先导化合物改造而来,这些天然产物为设计更理想的新药提供了结构独特的前体。它们通过不同的作用机理发挥治疗或预防肿瘤的作用,使天然产物的多样性发挥出抗癌作用的多样性。因此从中药或植物药中发现有效抗结肠癌的新药具有重要的科学意义和巨大的市场前景。水线草为茜草科植物水线草Oldenlandia(Hedyotis)corymbosaL.的全草,又称伞房花耳草、蛇舌草,在我国分布广泛,具有清热解毒,利湿消肿、抗肿瘤以及提高机体免疫力等功效,临床常用于治疗咽喉肿痛、湿热黄疸、毒蛇咬伤以及胃癌、食管癌、肠癌、鼻咽癌等恶性肿瘤。近年来,水线草在抗肿瘤方面的作用引起了药学工作者的关注,也得到了国内外学者部分研究结果的支持。据报道,水线草在传统水线胃安复方中是作为君药用于慢性胃炎、肠道肿瘤等方面的临床治疗,效果显著。另外,水线草也具有抑制植入皮下肿瘤的作用,且能显著促进白细胞放射性损伤后的恢复。本实验的前期工作则发现水线草粗提物可以抑制结肠癌细胞体外的增殖、抑制鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)新生血管的生成,显示出明显的抗肿瘤活性。这些研究结果均表明水线草具有抑制肿瘤的作用。目前对水线草中抗肿瘤活性的化学成分知之甚少,对其抗肿瘤作用的研究大部分仍然停留在复合成分阶段,因而,在水线草中获得结构新颖的具有抗结肠癌活性的化合物就成为可能。本实验中,我们在生物活性的指导下对水线草的化学成分进行了分离、纯化及鉴定,并找出了其中具有抗结肠癌活性的单体化合物,为进一步的研究奠定了基础。柘木为桑科构棘属(Cudraniatricuspidata(Carr.)Bur)植物,广泛分布于我国各地。柘木的干燥根及木材在传统医学中主要有清热凉血,舒筋活络的作用。除了传统的应用领域外,近代民间开始将柘木用于消化道肿瘤治疗。例如,浙江民间流传用柘木根水煎液来治疗癌症;上世纪70年代柘木被制成糖浆和注射剂用于临床治疗晚期消化道肿瘤,结果显示其能显著减轻化疗药物对免疫功能的抑制和损害从而降低化疗的毒副作用。另外,柘木也是已申请专利的抗癌中成药“生命之星”中的主要药材之一。临床试验证明,柘木对各种癌症均有较好的疗效并且毒副作用较小。柘木全株中含有黄酮类、生物碱及杂蛋白、鞣质、多糖等多种成分。随着柘木在肿瘤治疗上应用的扩大,近年来国内外学者开始投身于柘木化学成分与其药理研究中,并取得了一定进展。Isoalvaxanthone(IAX)和CudratricusxanthoneG(CTXG)是从柘木中分离得到的两个结构新颖的(口山)酮类化合物。前期工作表明,IAX和CTXG显示出明显的抑制消化道癌细胞生长的作用。本实验在前期工作的基础上对柘木的活性成分IAX和CTXG进行了抗结肠癌活性的鉴定并对它们的作用机理进行了研究。本论文主要分成以下几个部分:一、水线草化学成分的分离、纯化与结构鉴定首先,我们采用正、反相柱层析的方法在抗结肠癌活性的指导下对水线草中的化学成分进行了分析、分离及纯化,得到活性单体化合物。其次,利用核磁共振及各种波谱方法对分离所得的单体化合物进行了化学结构的鉴定,共得到了23个化合物,包括3个新的环烯醚萜苷类化合物和20个已知化合物,为进一步研究奠定了基础。二、水线草抗结肠癌活性成分的鉴定及作用机理首先,通过多种活性鉴定的方法分别检测了不同分离阶段的水线草提取物对结肠癌细胞的存活率、细胞形态、细胞周期分布等多方面的影响,评估了各样品的体外抗结肠癌活性,为活性成分的分离提供了方向。其次,对最后分离得到的23个单体化合物进行了活性鉴定,发现其中有4个化合物具有显著的抗结肠癌活性。它们是槲皮素、香豆素化合物HedyotisconeA、β-谷甾醇和丁香酸,IC_(50)分别为104.3μg/ml、154.2μg/ml、104.5μg/ml、112.9μg/ml。其中,香豆素化合物HedyotisconeA虽为已知化合物,但尚未有过关于其生物活性的报道。我们分别