我的论文中的实验方法.doc

第二章 含6×His标签T7Select10-3b载体的构建 2.1 材料与方法 2.1.1 材料 2.1.1.1 实验材料及试剂 宿主菌E.coli BLT5615 Novagen公司 T7Select10-3b噬菌体 Novagen公司 EcoR I/Hind III End Modification Kit Novagen公司 DNA Ligation Kit Novagen公司 T7Select10-3b Cloning Kit Novagen公司 DNase I TaKaRa 公司 β-Agarase TaKaRa 公司 TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit TaKaRa 公司 2000 bp DNA Ladder TaKaRa 公司 Taq DNA 聚合酶 TaKaRa 公司 IPTG AMRESCO公司 DNA纯化试剂盒 庄盟公司 其他常用试剂：羧苄青霉素(Carb) 、苯酚、氯仿、异戊醇、异丙醇、乙醇、胰蛋白胨、酵母菌粉、琼脂、琼脂糖、NaCl、甘油、PEG8000等为进口分装或国产分析纯。引物合成与测序由北京宝瑞通生物科技有限公司完成。LB液体培养基：胰蛋白胨10g/L；酵母菌粉5g/L，NaCl 10g/L，pH 7.0 LB固体培养基：胰蛋白胨10g/L；酵母菌粉5g/L，NaCl 10g/L，琼脂15g/L，pH 7.0 LB固体培养基：胰蛋白胨10g/L；酵母菌粉5g/L，NaCl 10g/L，琼脂15g/L，pH 7.0 0mg/ml羧苄青霉素溶液:Amp 1 g溶解于10mL蒸馏水中，过滤除菌，-20℃保存。 20mM Tris HCl，pH 8.0，100mM NaCl，6mM MgSO4 50×TAE电泳缓冲液:Tris 24.2g，冰醋酸5. 7mL, 0. 25mo1/L EDTA(pH8. 0) 20m1， 加蒸馏水至100mL，室温保存，使用时用双蒸水稀释至1×工作浓度。 1%琼脂糖凝胶：琼脂糖1 g，加入100 mL 0.5×TBE溶液。 2.1.1.4 主要实验仪器 分析天平 上海民桥精密科学仪器有限公司，FA1104N PH计 上海任氏电子有限公司，6173 PCR仪 Whatman Biometra，T-Gradient 电泳仪 北京六一仪器厂 自动双重纯水蒸馏器 上海亚荣生化仪器厂，SZ-93 紫外/可见分光光度计 北京普析通用仪器有限公司，TU-1810 生物洁净工作台 北京东联哈尔仪器制造有限公司，BCN-1360B 手掌型离心机 海门市麒麟医用仪器厂，Lx-100 高速冷冻离心机 sigma，2-16K 液氮容器