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枸杞花总黄酮的测定 摘要：依次以水和体积分数９５％的乙醇为提取剂，采用超声法提取获得宁夏枸杞（ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ ｌ．）花的提取物，采用ａｌ（ｎｏ３）３法测得样品中的总黄酮含量为２．９５ ｍｇ／ｇ。结果表明该方法可快速评价枸杞花中的总黄酮水平。 关键词：枸杞花；黄酮；芦丁；测定 ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ tｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ ｆｌｏｗｅｒｓ ｂｅｉ ｚｈａｎ－ｌｉｎ，ｚｈａｎｇ ｘｉｎ，ｃａｏ ｊｕｎ－ｍａｉ，ｌｅｉ ｑｉａｎ，ｌｕ ｗｅｉ－ｌａｉ （ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， ｂｅｉｆａｎｇ ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ， ｙｉｎｃｈｕａｎ ７５００２１ ｎｉｎｇｘｉａ， ｃｈｉｎａ） ａｂｓｔｒａｃｔ： ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ ｌ． ｆｌｏｗｅｒｓ ｆｒｏｍ ｎｉｎｇｘｉａ ｗｅｒｅ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｈ２ｏ ａｎｄ ９５％（ｖ／ｖ） ｅｔｈａｎｏｌ， ａｎｄ ｔｈｅｎ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ａｌ（ｎｏ３）３ ｍｅｔｈｏｄ． ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ content ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ was ２．９５ ｍｇ／ｇ． ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ ａｎｄ ｆａｓｔ ｆｏｒ ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｌ. ｂａｒｂａｒｕｍ ｌ． ｆｌｏｗｅｒｓ ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ ｌ． ｆｌｏｗｅｒ； ｆｌａｖｏｎｏｉｄ； ｒｕｔｉｎ； determination 枸杞（ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ ｌ．）全身是宝，枸杞花通常单生或数朵簇生于叶腋或短枝上，紫色或淡紫色，花梗细，花期４月至１０月［１，２］。黄酮类化合物在植物界分布广泛，对植物生长具有重要作用，同时也具有一定的抗菌防病功效［３］。通常条件下，植物体内的黄酮多以和糖结合形成的苷类存在，少数以游离形式存在，现在则泛指２个苯环通过中央三碳链相互联结（ｃ６－ｃ３－ｃ６）而成的一系列化合物［４，５］。目前，人们对枸杞的药用成分及药用机理等研究较多，但对枸杞花研究较少。已有报道包括枸杞的花联合现象［６］和枸杞花色素提取工艺研究［７］。本研究采用比色法测定枸杞花中总黄酮类化合物的含量，为快速评价枸杞花中的黄酮类化合物水平提供参考。 １ 材料与方法 １．１ 材料与试剂 鲜枸杞花（宁杞１号）于２０１０年８月采自宁夏育新枸杞园，标本保存于北方民族大学生物科学系植物标本室。枸杞花放置阴干后，粉碎并置于密封塑料袋中保藏备用。 芦丁标准品、无水乙醇、ｎａｎｏ２、ａｌ（ｎｏ３）３、ｎａｏｈ，去离子水。 １．２ 仪器 ｆｗ１００型高速粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）、ｆａ２１０４ｂ电子天平（上海精密科学仪器有限公司）、ｋｑ－５００ｂ超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）、减压蒸馏装置、ａｌｐｈａ １－２冷冻干燥机（德国ｍａｒｉｎ ｃｈｒｉｓｔ 公司）、ｓｉｇｍａ ４ｋ１５离心机（德国ｓｉｇｍａ公司）、ｕｖ７６５紫外－可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）。 １．３ 方法 １．３．１ 样品制备 水提取物的制备：称取干燥处理的枸杞花５．０ ｇ于２５０ ｍｌ锥形瓶中，加入ｈ２ｏ １００ ｍｌ，在５０ ℃下超声提取５０ ｍｉｎ，然后将提取液真空抽滤，得澄清提取液，残渣用蒸馏水洗涤后，重复提取２～３次，收集合并抽滤后的提取液，减压蒸馏得浓缩提取液。 乙醇提取物的制备：向上述枸杞花残渣中加入６０％（体积分数，下同）的乙醇，提取方法及步骤与水提取方法相同，然后依次用８５％和９５％的乙醇对经６０％的乙醇提取后的残渣进行提取。合并上述各浓度的乙醇提取液，减压蒸馏浓缩，将浓缩液－７０ ℃下过夜后，真空干燥２７ ｈ，取出冷冻粉，加入９５％的乙醇，以１０ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１５ ｍｉｎ，收集上清液，即为乙醇提取液，测定其体积，置于４ ℃下，待用。 收集上述步骤的沉淀，加入适量ｈ２ｏ后摇匀，待沉淀溶解后，以１０ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１５ ｍｉｎ，去上清，将上清液与蒸馏水提取物溶液合并到一起，即为水提取液，记录总体积，并置于４ ℃下待用。 １．３．２ 黄酮类化合物的测定 准确称取在１０５ ℃下干燥至恒重的芦丁标准品３０ ｍｇ于１００ ｍｌ容量瓶，用６０％的乙醇溶解后定容，即为０．３ ｍｇ／ｍｌ的芦丁标准溶液。准确移取芦丁标准溶液６ ｍｌ，加入质量