必威体育精装版寄生虫病检测检验技术.doc

寄生虫病检测 检验技术 1一般检查法 1．1粪便的检查 粪便检查是确定肠道寄生虫病诊断的最主要的方法，也是属于临床化验室常规检查的方法之一。 1．1．1直接涂片法 此法用于检查虫卵、滋养体和包囊。为了避免遗漏，一般需连续检查三张涂片。此法的优点是操作简便，迅速。缺点是阳性率较低，视野中杂质较多，虫卵或原虫少时不易查到。 1．1．1．1生理盐水涂片法： 操作方法 取洁净的载玻片一张，于中央滴1~2滴生理盐水。 用便签挑取约火柴头大小的一块粪便（约0.1g），置盐水中涂抹均匀，成半透明的混悬液，其厚薄以透过书上的铅字为宜，如果太厚阻碍光线的透过，太薄则影响检查效果（必要时加盖玻片）。 先用低倍镜观察，从边缘开始来回顺序推动移动器，仔细寻找虫卵。 找到虫卵后，应将虫卵移至视野中央，辨认是何虫卵（必要时可换高倍镜进一步观察）。 注意事项： 检查痢疾阿米巴原虫时，要挑取带有脓血的粪便。 检查原虫包囊时，所取的粪便应再少一些，粪膜涂的再薄一些，否则包囊不易找到。 检查原虫滋养体时，要注意保温，避免化学药品和尿的污染，影响滋养体伪足的运动。 防止涂片变干，可随时滴加生理盐水。一般不用油镜观察。 某些植物细胞很像虫卵，是要加以鉴别，植物细胞的内部结构不象虫卵那样规则，外形多扁平，用嘴轻吹时，植物细胞往往易翻动或变形。 要注意虫卵与人类酵母菌的区别，很易与包囊混淆，酵母菌为无色圆形或卵圆形小体，大小不一，内含一个较大的透明体，其四周有狭窄的细胞浆，浆内含有少数折光形小体和核，有时透明体偏于一边。如用蒸馏水稀释粪便涂片，酵母菌即被裂解消失，而原虫包囊仍存在。 只有雄性寄生虫也无虫卵，切勿随意报告阴性结果。 采集的标本要新鲜，一般不宜超过一昼夜，否则原虫或某些虫卵易变形或者死亡，引起误诊；采集标本的容器要清洁，避免与化学药物或尿混合，否则原虫滋养体很快死亡，影响检出率。 1．1．1．2碘液涂片法： 用碘液代替生理盐水，适用于肠道原虫的检查。 方法 检查原虫包囊时在干净的载玻片上滴一滴碘液，然后取少许粪便，于碘液中，涂抹均匀，便可检查。 检查原虫活滋养体时，可在用生理盐水涂匀的粪膜附近滴一滴碘液，取少许粪便在碘液中涂匀，勿使两块粪膜相混合，盖上盖玻片，便可观察。这样的涂片一半染色，检查包囊，另一半不染色，可以检查活滋养体。 试剂： 1、碘液染色液： 碘化钾 4g 碘 2g 蒸馏水 100ml 先将碘化钾溶于少量水中，然后加碘溶解后，再加水到100ml。 2、碘伊红染色液 碘液：碘化钾5g溶于生理盐水100ml，加碘至饱和。 伊红液：伊红饱和于生理盐水中。应用时将上述两液等量混合。 注意事项： 碘易升华，放置数日变淡、均以原液瓶底有碘片沉集，每日取少量上清液使用为宜。 碘液过浓，易使标本沉集成块且使原虫染色过深，而致构造不大明显，故在使用时，注意调节碘液量。 碘、伊红染色时背景较深，不如使用碘液时背景清楚。 1．1．1．3快速染色法 快速染色法用于肠道原虫的快速诊断。 固定液的配制 丙酮 50ml 冰醋酸 50ml 甲醛溶液 10ml 邵氏液 890ml 以1.25g酚复红与0.5g耐绿混合于上述液中即可使用。混合液应贮存于棕色玻璃瓶中，严密封口，二个月后染液仍稳定，染色结果不变。 操作方法 用棉签将粪便在玻片上涂成薄层。 用滴管将混合液滴在粪涂片上，并将粪膜完全盖住，使之染色并固定。 将载玻片在酒精灯上慢慢加热，待蒸汽出现后，即可缓慢地在火焰上经过2~3次。 立即用自来水轻轻冲洗。 分别依次放置于50%及70%酒精中，每次各需时30秒钟。然后放在95%及纯酒精中，各15秒钟，最后置于二甲苯中透明1分钟。 封固于香胶中，即能做镜检。 用此法染成的标本外观与苏木素染色法相同，呈蓝紫色，核的微细构造与拟染色体特别明显，所需时间仅2.5分钟，不需要特殊的技巧，而且保存液与固定液混合于染液中。染色标本可保存两个月，染色的特征上都没有明显的改变。 1．1．1．4煌焦油蓝、伊红染色法： 此种染色法是一种活体湿片快速染色法，不影响阿米巴原虫的活力，着色不明，便于检出虫体和鉴定虫种。 试剂的配制 甲液： 煌焦油蓝 0.2g 氯化钠 6.35g 枸橼酸钠 1.1g 饱和氯化钠溶液 0.1ml 蒸馏水 100ml 乙液 水溶性金红 1.0g 蒸馏水