林森荣-论文任务书.doc

集 美 大 学 毕业设计（论文）任务书 水产 学院 动植物检疫 专业 检疫0814 班学生 林森荣 学号 2008253121 一、毕业设计（论文）题目 哈维氏弧菌减毒疫苗的制备及免疫保护的研究 二、 毕业设计（论文）工作规定进行的日期：2012年1月14日 起 至2012年5月18日 止三、毕业设计（论文）进行地点： 水产学院免疫学实验室 四、任务书的内容（包括：目的意义、研究内容、工作计划、成果要求、参考文献） (一)目的意义： 哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）广泛分布于海洋环境中，是水产养殖中一类比较重要的致病性弧菌，曾感染鳎类、牙鲆、鲈鱼、石斑鱼等，是重要的海水鱼致病菌，曾使全世界的水产养殖遭受巨大的经济损失。在疾病防治过程中，长期盲目的大量使用抗生素使得细菌的耐药性越来越强，而且药物残留也是一个严重的问题，为了确保食品安全，有关学者致力于用疫苗接种的方法防御及抵抗病原菌的侵害。目前，许多学者先后报道了各种哈维氏弧菌疫苗，有灭活疫苗、重组亚单位疫苗、减毒疫苗。对于许多病原，减毒活疫苗用于防治细菌性疾病是一种有效的方式。获得减毒疫苗的传统方法是利用物理或化学的方法使菌株突变、在宿主体内多次传代培养、用特定的培养基引起菌株随机突变等几种方式使毒力菌株的毒力下降。另外，也可通过转座子的随机插入引起突变，还可利用基因工程技术通过定点突变使得病原微生物的毒力降低或减弱。 利福平（Rifampicin，Rif）在细菌细胞内可与依赖DNA的RNA聚合酶的β亚基牢固结合，阻止该酶与DNA的结合，从而阻断RNA转录过程，使蛋白质无法合成。研究证实具有利福平抗性的细菌的毒力大大下降，是制备减毒活疫苗的一种有效的方法。研究表明具有利福平抗性的爱德华氏菌（Edwardsiella ictaluri）、嗜冷黄杆菌（Flavobacterium psychrophilum）、柱状黄杆菌（Flavobacterium columnare），鳗弧菌（V.anguillarum）等减毒株有作为减毒疫苗的潜能，针对鲶鱼的柱状黄杆菌减毒疫苗已经商品化。本项研究中，我们以从半滑舌鳎病灶中分离到的一株哈维氏弧菌为研究对象，利用利福平筛选的方法筛选到具有利福平抗性的哈维氏弧菌减毒株，并研究了其相关的生物学特性及并进行免疫保护的研究，以期为提高半滑舌鳎免疫力和抗病力及其健康养殖上提出新的思路。 （二）研究内容： 1.哈维氏弧菌减毒株的筛选——逐渐增加利福平的浓度筛选具有利福平抗性的减毒株； 2.哈维氏弧菌减毒株的生物学特性研究——表型特征分析，DNA分析，OMP和LPS分析 3.哈维氏弧菌减毒株对半滑舌鳎的免疫保护研究——免疫保护率的测定，血清抗体效价的测定，血清溶菌酶活性测定，血清补体活性测定测定，血清酸性磷酸酶活性测定，头肾白细胞吞噬杀伤活性测定，头肾白细胞呼吸爆发活性测定，头肾白细胞MPO活性测定，头肾白细胞NO活性测定； 实验材料 a．实验材料：健康半滑舌鳎、哈维氏弧菌、溶菌酶检测试剂盒、酸性磷酸酶检测试剂盒、MPO检测试剂盒、 NO检测试剂盒等。 b．主要仪器