检验步骤(标准版).doc

1、鸡新城疫低毒力活疫苗（Lasota株） 1、安全检验 检验步骤：2~7日龄SPF鸡20只—→10只滴鼻免疫0.05ml（含10羽份）；10只不接种对照—→同条件分别饲养10日，因无不良反应（如有非特异性死亡，免疫对照组均不得超过1只） 疫苗稀释：500羽/瓶—→加2.5ml生理盐水即可（200羽/ml即20羽/0.1ml即10羽/0.05ml） 2、效力检验 检验步骤：按瓶签注明羽份（500羽/瓶），用灭菌生理盐水将疫苗稀释至1羽/0.1ml—→再进行10倍系列稀释—→取3个适宜稀释度分别尿囊腔（AS）接种10日龄SPF鸡胚5枚（共15枚）每胚0.1 ml—→37℃继续孵育120h—→48h前弃去；48~120h内死亡鸡胚收获尿囊液（同一稀释度等量混合）分别测定红细胞凝集价；120h活胚逐个测红细胞凝集价（微量法不低于1:128者判为感染）—→计算EID50,每羽份病毒含量应≥106.0 EID50. 疫苗稀释：500羽/瓶—→加５ml生理盐水（100羽/ml）—→10倍稀释（10羽/ml即1羽/0.1ml）—→再进行10倍系列稀释（一般取10-5、10-6、10-7） 3、鉴别检验 检验步骤：将疫苗用生理盐水稀释至105.0 EID50/0.1ml—→与等量抗鸡新城疫特异性血清混合—→室温作用60min—→尿囊腔（AS）接种10日龄SPF鸡胚10枚，每胚0.1 ml—→37℃继续孵育120h—→24~120h内应不引起特异性死亡，且至少存活8枚；—→每枚鸡胚红细胞凝试验应为阴性。 疫苗稀释：通过效力检验计算毒价，例如病毒含量为108.6 EID50/0.1ml要稀释至105.0 EID50/0.1ml，稀释103.6倍。 2、鸡新城疫中等毒力活疫苗（I系） 1、安全检验 检验步骤：2~8月龄健康易感鸡4只—→每只肌肉注射0.2ml？？？（含10个使用剂量）的疫苗—→观察10~14日，允许有不良反应，但须在14日内恢复，疫苗判为合格。如有1只鸡出现腿麻痹，不能恢复时，允许用8只鸡重检一次，重检结果如有1只鸡出现上述同样反应，疫苗判为不合格。 疫苗稀释：500羽/瓶—→加５ml生理盐水（100羽/ml即20羽/0.2ml）—→再2倍稀释（10羽/0.2ml） 2、效力检验 检验步骤：按瓶签注明羽份，用灭菌生理盐水将疫苗稀释至1羽/0.1ml—→再进行10倍系列稀释—→取3个适宜稀释度（如10-4、10-5、10-6）分别尿囊腔（AS）接种10日龄SPF鸡胚5枚（共15枚）每胚0.1 ml—→37℃继续孵育24~72h—→记录鸡胚死亡情况，死亡胎儿应有明显病痕。—→同一稀释度的死胚胚液等量混合，测定血凝价，［微量法不低于（1:64）~（1:512）判为感染］—→计算EID50，每羽份病毒含量应≥105.0 EID50。 疫苗稀释：500羽/瓶—→加５ml生理盐水（100羽/ml）—→10倍稀释（10羽/ml即1羽/0.1ml）—→再进行10倍系列稀释（一般取10-5、10-6、10-7） 3、鉴别检验 检验步骤：用灭菌生理盐水将疫苗稀释至103.0 EL D50？？？50/0.1ml—→与等量抗鸡新城疫特异性血清混合—→室温作用60min—→尿囊腔（AS）接种10日龄SPF鸡胚10枚，每胚0.1 ml—→37℃继续孵育120h—→24~120h内应不引起特异性死亡，且至少健活8枚；—→每枚鸡胚红细胞凝试验应为阴性。 疫苗稀释：通过效力检验计算毒价， 3、鸡痘活疫苗 1、安全检验 检验步骤：1~14日龄SPF鸡10只—→各肌肉注射0.2 ml（含10羽份）—→观察10日应全部健活 疫苗稀释：500羽/瓶—→加５ml生理盐水（100羽/ml）—→2倍稀释（50羽/ml即10羽/0.2ml） 2、效力检验 检验步骤：按瓶签注明羽份，将疫苗用生理盐水稀释至1羽/0.2ml—→再进行10倍系列稀释—→取3个适宜稀释度经绒毛尿囊膜（CAM）分别接种11~12日龄SPF鸡胚5枚（共15枚）每胚0.2 ml—→37℃继续孵育96~120h—→鸡胚绒毛尿囊膜水肿增厚或出现豆斑判为感染—→计算EID50,每羽份病毒含量应≥103.0 EID50. 疫苗稀释：500羽/瓶—→加５ml生理盐水（100羽/ml）—→10倍稀释（10羽/ml即1羽/0.1ml）—→2倍稀释（5羽/ml即1羽/0.2ml）—→再进行10倍系列稀释（一般取10-2、10-3、10-4） NDV鸡新城疫病毒 FPV鸡痘病毒 IBV鸡传染性支气管炎病毒 IBDV鸡传染性法氏囊病毒 ILT鸡传染性喉气管炎病毒 4、猪多杀性巴士杆菌病活疫苗 1、安全检验 （1）小鼠检验： 检验步骤：18~22克小白鼠5只—→皮下注射0.2 ml（含1/