植物组织培养实验.doc

实验一 植物组织培养实验室的构造和功能 一、目的要求： 掌握如何组建植物组织培养实验室，熟悉组培中设计的各种仪器设备和器皿用具。 超净工作台、空调机、蒸馏水发生器、高压灭菌锅、低温冰箱、普通冰箱、电磁炉、各种电子天平、pH仪器等设备，以及各种试验器皿和器械用具等。 1.了解组织培养实验室守则以及有关注意事项。 2.掌握仪器设备和器皿用具的名称与用途以及实验室的构造。 3.参观组培实验室的构建情况，包括准备室（化学实验室）、缓冲室、无菌操作室（接种室）和培养的设计要求，以及内部仪器设备的名称及其作用。 1.将本次实验内容整理成实验报告 2.设计一个植物组织培养实验室的组建方案。  一、目的要求 通过MS培养基母液的配制与保存，掌握配制与保存培养基母液的基本技能。 配制MS培养基所需的药品（见附表）。植物生长调节物质、各类天平、烧杯、容量瓶、蒸馏水0.1mol/L的NaOH0.1mol/L的HCl母液瓶、标签、冰箱等。 1.母液的配制 (将MS母液配置表画在黑板上，举例讲解母液的配制过程，包括称量、溶解、定容三步，再将班级分为五个组进行配制) 2.植物生长调节物质母液的配制 ①称量：用微量0.001或0.0001的分析天平或由电子天平准确称取生长素（或细胞分裂素）50mg。 ②溶解：生长素（如IAA、IBA、NAA、2、4-D）可用少量的0.1mol/LNaOH溶解，细胞分裂素（如KT、ZT、6-BA）可用0.1mol/L的HCl加热溶解。 ③定：将溶解的植物生长调节物质倒入50ml容量瓶，用水冲洗小烧杯数次，最后加蒸馏水定容至50ml，配制成浓度为1mg/的溶液。 3.母液的保存 ①装瓶：将配好的母液分别倒入瓶中，贴好标签，注明培养基名称、母液号、配制倍数（或浓度）以及配制日期。 ②储藏：将母液瓶储放在4℃冰箱内备用。 将本次实验内容整理成实验报告（叙述母液配置过程）。  mg） 母液 成分 规定量 扩大倍数 称取量 母液体积(ml) 配1L培养基 吸取量（ml） 编号 种类 1 大 量 元 素 KNO3 NH4NO3 MgSO4.7H2O KH2PO4 1900 1650 370 170 10 10 10 10 19000 16500 3700 1700 1000 100 2 钙 盐 CaCl2 332 10 3320 1000 100 3 微 量 元 素 MnSO4.H2O ZnSO4.7H2O H3BO3 KI NaMoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O 16.9 8.6 6.2 0.83 0.25 0.025 0.025 100 100 100 100 100 100 100 845 430 310 41.5 12.5 1.25 1.25 500 10 4 铁 盐 Na2-EDTA FeSO4.7H2O 37.3 34.5 100 100 1865 1725 500 10 5 维 生 素 甘氨酸 盐酸硫胺素(VB1) 盐酸吡哆醇(VB6) 烟酸 肌醇 2.0 0.1 0.5 0.5 100 100 100 100 100 100 100 5 25 25 5000 500 10 注意：配制前核实各种化学成分的含水量  实验三 固体培养基的配制 一、目的要求 通过MS固体培养基的配制，掌握配制培养基的基本技能。 MS培养基母液、植物生长调节剂、琼脂、蔗糖、蒸馏水、移液管、量筒、容量瓶、电磁炉、酸度计、0.1mol/LNaOH(HCl)、培养瓶、记号笔等。 1．按母液顺序和规定量，用量筒和移液管提取母液，放入1000ml的容量瓶中，MS1-100ml、MS2-100ml、MS3-10ml、MS4-10ml、MS5-10ml。 2.加入植物生长调节剂，加入的种类与数量，视培养物不同而异，有时也可不加。 3.加入蔗糖若干，溶解定容至1000ml，再放入9g琼脂。 4.调整PH值，经酸度计测试，用0.1mol/LNaOH（HCl）把培养基PH值调整至5.8-6.0。 5.在电磁炉上加热溶液，并不断搅拌，使琼脂不断化。 6.分装培养基，把配好的培养基分装到50-150ml的培养瓶中，分装后立即加盖封口，用记号笔注明培养基名称。 火鹤：MS+NAA0.2 +蔗糖30g+琼脂9g，PH5.8-6.0。  实验四 培养基和培养用具的灭菌 一、目的要求 通过对培养基和培养用具的灭菌，掌握高压灭菌和干热灭菌的一般操作技术。 培养皿、三角瓶、注有培养基的培养瓶、装有蒸馏水的玻璃瓶、牛皮纸、镊子、剪刀等金属器械、高压灭菌器、烘箱等。 1.高压灭菌锅： ①洗涤 ②包扎 ③装水（需淹没电热丝） ④灭菌：把需灭菌的物品放入高压灭菌锅内，当压力达120kpa，锅内的温度为1