火腿肠中亚硝酸盐含量的测定修正版.pptx

火腿肠中亚硝酸盐含量的测定-----分光光度法15级24班B组杨泽奇 檀雨钊 贺仁杰 覃正前 杜 坤组员分配资料查找：檀雨钊 覃正前 杜坤方案设计：檀雨钊 杨泽奇PPT制作：杨泽奇 贺仁杰PPT陈述：小组全体成员实验目的1．熟悉可见分光光度计的使用方法。2．掌握火腿肠中的亚硝酸盐的含量测定的原理和方法。3．熟悉吸收曲线绘制的方法。亚硝酸盐的作用与测定意义如果摄取过多的亚硝酸盐，可使血红蛋白变成高铁血红蛋白，失去输氧能力，引起肠原性青紫症，中枢神经系统缺氧而受损，呼吸困难，循环衰竭，并造成血管扩张，血压下降，特别是亚硝酸盐被还原成亚硝酸胺后，是一个已确定的致癌物质。所以强制检验火腿肠生产企业中的加入亚硝酸盐与其含量具有非常重要的作用。我国卫生标准GB2760张规定：火腿肠肉制品中亚硝酸盐的残留量应≤0.15g/kg。火腿肠是一种富含蛋白质，风味独特，方便实惠而深受人民喜爱的肉制品。在加工过程中添加适量的亚硝酸盐与火腿肠中的某些成分作用，从而使火腿肠呈现良好的色泽，因此亚硝酸盐称为发色剂。在火腿肠工业生产中，原料内的红色是由肌红蛋白及血红蛋白所呈现的感官性状。亚硝酸盐是氮循环的中间产物，不稳定，实验原理----陈述人：杨泽奇 本实验采用盐酸-萘乙二胺法，其原理是用70℃蒸馏水从样品中提取亚硝酸根离子,再经亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白质、除去脂肪后；即过滤得到的清夜中的亚硝酸盐在弱酸条件下与对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物后，与萘乙二胺偶联生成红紫色的偶氮染料，并通过绘制吸收曲线得到最大吸收波长，将产物在最大吸收波长下用分光光度计测量其吸光度，并与标准曲线比较从而得到清夜中的亚硝酸盐含量。其反应式如下：实验试剂与仪器仪器：可见分光光度计，分析天平，水浴锅，比色皿（1cm），比色管（50ml），容量瓶（100ml），吸量管（1ml、5ml、10ml）、烧杯、胶头滴管、洗耳球，研体，漏斗，铁架台等试剂：0.05mg/ml亚硝酸盐标准液,6mg/ml对氨基苯磺酸，6mg/ml盐酸-萘乙二胺，饱和硼砂溶液，亚铁氰化钾溶液，乙酸锌溶液步骤01样品处理称取3g捣碎且搅拌均匀的火腿肠与50ml烧杯中，加入饱和硼砂溶液7.5ml，以玻璃搅匀，以70℃左右的蒸馏水约100ml将其全部洗入250ml的容量瓶中，置于沸水浴中加热15 min，取出冷却至室温，一边振荡一边加入5ml亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5ml乙酸锌溶液以沉淀蛋白质。加入蒸馏水定容至刻度，摇匀，静置30min。除去上层皮脂肪，清夜用滤纸过滤，弃去初滤液30ml，收集滤液备用步骤02亚硝酸盐氮标准溶液的配制取10.00ml眼硝酸盐氮标准储备液，置于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度。得到0.005mg/ml亚硝酸盐氮标准溶液步骤03系列标准溶液配制在一组编号1~6的50ml的比色管中，分别加入0、0.50、1.00、1.50、2.00和2.50ml亚硝酸盐氮标准液，用蒸馏水稀释至25ml刻度，分别计入1.00ml对氨基苯磺酸，密塞混匀，静置5分钟。分别加入1.00ml醋酸钠和a-萘胺，稀释至50ml刻度，静置10分钟步骤04吸收曲线的绘制以1号溶液做空白调零，对4号有色溶液于470nm~570nm波长范围内，每隔10nm分别测其吸光度，每次变换波长均用1号溶液做空白调零后再测定，并记录结果。以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制曲线，从曲线上找出最大波长步骤05工作曲线的绘制以1号溶液做空白调零，在最大波长下分别测定2~6号标准系列溶液的吸光度步骤06样品测定在50ml比色管中加入样品溶液至25ml刻度，分别加入1.00ml对氨基苯磺酸，密塞混匀，静置5分钟；分别加入1.00ml醋酸钠和盐酸-萘乙二胺，加蒸馏水稀释至50ml刻度，静置10分钟。同等条件下测定样品溶液的吸光度实验数据记录与处理1.吸收曲线的绘制将实验数据填入下表，并绘制吸收曲线，找出最大波长 λ(nm)吸光度/A2.工作曲线绘制及样品测定将系列标准溶液及样品的测定结果列于下表：编号 1 2 3 4 5 6 样品 V总 (ml)吸光度（A）3.计算样品中亚硝酸盐氮含量Cx是从工作曲线上查得标准液中的NO2-的浓度（mg/ml），Vx为样品体积（ml）W为火腿肠中的亚硝酸盐含量，m0为所取得火腿肠质量方案可行性分析在实验方案设计里有提到，目前火腿肠中的亚硝酸盐含量测定方法有分光光度法、传感器、发光分析法、气象色谱法、电极法及简便的试剂或试纸法等。经参考文献和资料，本实验采用的是分光光度法较为适宜。分光光度法设备简单、操作简便快捷、灵敏度高、稳定性好、结果直观、线性范围宽，用于肉制品中亚硝酸盐的残