橘皮多糖的提取.doc

桔子皮多糖的提取 一丶实验目的 学习从植物中提取多糖及多糖含量测定的方法。 了解换算因子的计算并掌握标准曲线的制作。 二丶仪器与药品 材料：新鲜的桔子皮 试剂：石油醚；无水乙醇；浓硫酸；三氯甲烷；正丁醇；标准葡萄糖溶液（0.04mg/mL)；苯酚溶液（5%） 仪器：电热恒温水浴箱；电热鼓风干燥箱；高速中药粉碎机；电子天平；200分光光度计；旋转蒸发器；循环水式多用真空泵 三丶实验步骤 桔子皮多糖的提取过程 称取50.00g样品粉末，置于500mL圆底烧瓶中，加入500mL80%的乙醇，回流2h，脱去表面脂肪、抽滤、风干，重复1次。脱脂后的样品，在恒温水浴中热水浸提2h，过滤后.滤渣在相同条件下重复浸提1次。将两次浸提液减压过滤，去除滤渣，合并两次滤液。将合并滤液在真空旋转蒸发器中浓缩至小体积，得粗多糖。往粗多糖里加入1;1的石油醚，去色素。挥干溶剂后，用Sevag试剂(氯仿∶正丁醇=4∶1)除蛋白，连续操作多次，直到完全脱除蛋白为止。在脱蛋白后的多糖溶液中加入3倍95%乙醇，沉淀用乙醇、丙酮及乙醚反复洗涤，经抽滤、真空干燥后得到精制多糖。 （2）换算因子的测定 精密称取干燥至恒重的精制桔子皮多糖20 mg，置于小烧杯中，加入适量的蒸馏水，水浴加热使其溶解，冷却后转入500mL 容量瓶中，定容至刻度，摇匀，作多糖储备液。吸取多糖储备液0.4mL 于带塞试管中，加蒸馏水至2.0 mL，按测定标准曲线的方法测其吸光度，按下面公式计算换算因子f 。m 为称取的多糖质量 (mg)，C为多糖中葡萄糖的质量浓度 (μg/mL)，D 为多糖的稀释倍数，做平衡实验4 次，求其平均值。 （3）标准曲线的制作 取葡萄糖于105 ℃干燥至恒质量，精确称取20mg，加蒸馏水溶解，定容至500mL。分别吸取0.2mL、 0.4mL、 0.6mL、 0.8mL、 1.0mL、 1.2mL、1.4mL、1.6mL 的葡萄糖标准液，置于10mL 试管中，各加水补足至2mL加入体积分数为5%的苯酚1m，摇匀，迅速滴加浓硫酸5mL静止 10 min摇匀，室温放置20min 后于490 nm测吸光度，以2.0mL 水按同样显色操作作为空白，以蒸馏水为空白，葡萄糖质量浓度C（μg/ml）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。以吸光度(A)对葡萄糖质量浓度(C)作回归处理，得回归方程: A=0.0098C+ 0.063相关系数r = 0.990，n=8。 （4)样品溶液中桔子皮多糖含量测定 精密吸取所得样品溶液0.4 mL于带塞试管中，加蒸馏水至 2 mL，按测定标准曲线的方法测其吸光度（A），由回归方程计算样品液中葡萄糖质量浓度 (C)，按下面公式计算样品中多糖的质量分数（）。C为样品溶液中葡萄糖质量浓度(μg/mL)，D为样品溶液的稀释倍数， f 为换算因子，m为称取桔子皮干粉的重量(g) 。 桔子皮多糖的提取综述 摘要：将桔子皮烘干，粉碎，先用80%的乙醇溶液于80℃回流2 个小时，除去单糖和低聚糖， 再用石油醚脱脂、Sevag 法除蛋白得到浅黄色桔子皮多糖，经提纯后得到灰白色桔子皮多糖。通过正交实验法研究了浸提温度、浸提时间、料水比三因素对桔子皮多糖提取的影响。初步筛选出桔子皮多糖最佳提取条件为，料水比1∶35，浸提温度90℃，浸提时间120min。用硫酸—苯酚法对桔子皮多糖含量进行测定，结果表明；.桔子皮多糖换算因子为3.15，桔子皮多糖平均质量分数为2.36%，桔子皮多糖测定相对标准偏差(RSD)为2.14%。 关键词：桔子皮；多糖；提取；分析 桔子皮，在我国的传统医药中又叫陈皮，系芸香科植物橘树的成熟果实之干燥果皮，味苦、辛，性温。归肺、脾经。功能理气化痰、健胃除湿、降低血压等，主要用于治疗胸腔胀满，食少吐泻，咳嗽痰多等症，因此是一种很好的中药材。桔子皮除含有多糖外，还含有大量的对人体有益的维生素B 和C，香精油，芳香油，麝香草酚等有机物。桔子皮中的多糖被制成保健品和食品着色添加剂肯定具有重要的开发价值。有关桔子皮中色素、类黄酮、果胶等物质的研究很多，而对桔子皮多糖的有关研究则少见报道。 多糖类物质是生命代谢不可缺少的重要物质，它是由多个单糖或其衍生物聚合而成的大分子活性化合物。对多糖的研究，最早是在20 世纪40 年代，但其作为广谱免疫促进剂而引起人们的极大重视则是在60 年代，经过40 余年的不断发展，人们对多糖这一类重要生命物质产生了新的认识，使这一学科成为目前生命科学中研究最活跃的领域之一。自20 世纪60 年代多糖的生理活性功能被发现后，有关多糖的研究日益受到世界各国的重视。近年来发现植物多糖具有抗病毒、