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赣 南 医 学 院 2007届毕业生论文 高速逆流色谱与微波辅助萃取分离纯化 侧柏中的黄酮类化合物 学校名称： 赣西医学院 学生姓名： 李文 专 业： 药学 学 号： 班 级： 03药学本科班 完成日期： 2007年4月 高速逆流色谱与微波辅助萃取分离纯化 侧柏中的黄酮类化合物 摘要 首次采用高速逆流色谱仪TBE2300A与微波辅助萃取对侧柏药材中的活性黄酮类化合物进行分离纯化。实验过程中：微波辅助萃取，温度80℃，时间29min，功率800W;高速逆流色谱提取，对溶剂系统和参数条件进行系统的优化,获得较好的分离条件,溶剂系统:正丁醇-乙酸乙酯-正己烷-水(6∶1∶1∶12 ,V / V ) ,上相(有机相) 为固定相,下相(水相) 为流动相,反相洗脱；进样浓度:20mg/ mL ；进样体积:20mL ；流速:3.0mL/ min ；转速:850 r/ min 。进一步分离获得四种高纯度黄酮类化合物,经薄层色谱鉴定,分别为A类黄酮、B类黄酮、C类黄酮、D类黄酮，但其具体结构尚待确定。 关键词 高速逆流色谱 微波萃取 　侧柏叶　黄酮类化合物 1 引言 侧柏叶为柏科(Cupressaceae) 植物侧柏Biota orientalis (L .) Endl . 的干燥嫩枝叶,侧柏别名扁柏、香柏、片柏、片松。常绿乔木,多为栽培,除青海、新疆外,全国均有分布且为我国特产。侧柏叶气清香,味苦涩、微辛。具有凉血止血、清肺止咳功效,在临床上常用于治疗出血症、风湿痹痛、高血压、咳喘等。 目前对侧柏叶的研究主要是关于其挥发油研究和总黄酮的研究，部分是关于其提取工艺的研究探索。其中对侧柏叶黄酮化合物研究有:炮制研究、质量标准研究、化学成分研究（挥发油、黄酮、鞣质、无机元素）、药理研究（止血作用、抗炎作用、抗肿瘤活性、）、临床研究。目前文献报道侧柏叶的主要成分是黄酮类化合物, 而且主要针对黄酮类化合物的含量测定,从其中提出的单体化合物只有对槲皮素和槲皮苷的报道。而黄酮类化合物成分甚多,不能只局限于槲皮素和槲皮苷, 故对侧柏叶中黄酮类成分的研究有待进一步深入。 另外，对侧柏叶提取分离方法的主要文献报道有：微波辅助萃取法、超临界流体萃取(SFE)、索氏提取法、热回流法、冷浸法、超声波法、水蒸汽蒸馏法、渗漉法、加压逆流提取法、旋流提取法、水提法、固相微萃取法、高压液相法、高速逆流色谱法、柱色谱法、重结晶法等。其中都是单独用到了微波辅助萃取法或高速逆流色谱法，未见关于两者联用提取分离侧柏叶黄酮化合物的报道。 高速逆流色谱(high-speedc ounter-currentch romatography,HSCCC)是一种基于液-液多级逆流萃取建立的色谱体系，以轻巧的聚四氟乙烯螺旋管作分离柱，在行星式运动中连续地完成整个分配、传递、分离过程。无固相载体，避免了待分离样品与固相载体表面产生化学反应而变不可逆吸附；分辨率高，可制备纯品；可采用正向或反向的连续洗脱、步级洗脱、梯度洗脱等方式；可采用多种多样的溶剂系统实现物质的对流分配；能在一个流程中分离复杂样品中极性差异极大的各个组分，特别是能有效地分离强极性的组分；仪器及试剂成本明显低于高效液相色谱(highperformance liquid chromatography,HPLC),适用于制备高纯度、高附加值的化合物。近20年来HSCCC在生物化学、医药学、农业、环境、材料、化工、海洋生物等众多领域成功应用。因HSCCC可采用不同物化特性的溶剂体系和多样性的操作条件，具有较强的适应性，为从复杂的天然产物粗制品中提取不同特性(如不同极性)的有效成分提供了有利条件，因此在80年代后期，在世界范围内的“回归大自然”浪潮的席卷下，HSCCC被大量用于天然产物化学成分的分析和制备分离。将 HS CC C用于天然产物分离，一方面可以在高类别天然药物新药的研发中，逐级分离制备活性部位或活性成分，配合活性跟踪与人药部位的设计；另一方面可以配合高类别中药新药申报工作，制备必需的高纯度指标成分和必需控制的杂质成分。本文探索了丹参脂溶性成分和雪莲黄酮的HSCCC分离条件。 高速逆流色谱法分离的优点：首先,它不用固态支撑体,不存在样品组分的吸附、变性、失活、拖尾等现象,节省了材料和溶媒消耗；其次,它操作简便,重现性好,分离量较大,分离效率高,分离时间短,一般几个小时即可完成一次分离；此外,有广泛的液一液分配体系可供选择,体系更换方便、快捷；它的进样量大,这对于样品的纯化制备显示