流动注射化学发光.docx

流动注射-化学发光联用技术用于药片中的盐酸环丙沙星含量的研究摘要本实验采用利用盐酸环丙沙星对Ce（IV）-Na2SO3化学发光的增敏作用实现流动注射-化学发光联用技术用于药片中的盐酸环丙沙星含量研究，优化浓度后的流路设计为将浓度为 5.0×10-3mol/L 的 Na2SO3溶液与盐酸环丙沙星溶液充分混合后，加入5.0×10-4mol/L 的 Ce4+进行发光检测。实验测得线性回归方程 y = 1704.83x + 377.32 （R2 = 0.9902），测得盐酸环丙沙星浓度为 1.32mg/L。经检验，本检测方法的检出限为 0.08001mg/L，相对标准偏差为2.75%。关键词流动注射法化学发光盐酸环丙沙星标准校准曲线法条件优化1 引言盐酸环丙沙星属于第三代喹诺酮类药物，抗菌能力强，临床广泛应用于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌引起的感染，对β-内酰胺抗生素、氨基糖苷类以及四环素等多重药菌具有较好的抗菌活性[1]。目前，盐酸环丙沙星的测定方法有很多，主要有HPLC[2]、电位法[3]、比色法[4]、毛细管电泳法[5]、分光光度法[6]等。然而，这些方法往往存在仪器昂贵，操作复杂，测量耗时较长等问题。在碱性介质中，环丙沙星对鲁米诺-KIO4-Co2+ 反应体系产生的化学发光明显地受到抑制，且化学发光强度的抑制强度与环丙沙星的浓度成正比关系。在酸性条件下，盐酸环丙沙星对Ce（IV）-Na2SO3微弱化学发光体系具有很强的增敏作用，据此，建立了流动注射化学发光法测定盐酸环丙沙星的新方法[7]。相对于其他检测方法，化学发光由于不需要外来光源而消除了背景光的干扰，大大提高了检测精度。相对于传统注射技术，流动注射技术不仅具有低消耗高效率的优点，而且适应性广泛且测量精度高。流动注射-化学发光联用技术由于其操作简单快速、高精度和高效率等优点而在化学分析领域具有广泛的应用[8]。本实验采用流动注射-化学发光联用技术测定指定盐酸环丙沙星药片中盐酸环丙沙星含量，对实验条件优化后，通过检测其检出限和相对标准偏差评估该实验的准确性。实验证明本方法高灵敏度和较宽的动态范围，仪器简单，操作简捷，结果准确可靠。2 实验部分2.1仪器与试剂2.1.1 仪器BPCL 微弱发光测量仪（中国科学院生物物理研究所）；HL-2D 恒流泵（上海青浦沪西仪器厂）；八通阀（杭州）；联机计算机。2.1.2 试剂硫酸铈溶液：4.0×10-4 mol/L（用0.05 mol/l 硫酸溶解）；亚硫酸钠溶液：8.0×10-2 mol/l；盐酸环丙沙星标准溶液：100.0 mg/L(用 0.04 mol/l 盐酸溶解)；盐酸环丙沙星滴眼液。所用试剂均为分析纯，所用水为二次蒸馏水。2.2 仪器预热接通计算机电源，启动 windows 系统；打开 BPCL 主机电源，仪器预热 30min 以上，选择所需温度及负高压。打开快门开启BPCL测量程序，设定参数后启动测量。清洗流路：开启蠕动泵，旋紧蠕动泵上面及两侧的4个旋钮，选择蠕动泵转向，打开蠕动泵，选择流速（可以用 60rpm ）。按图1组装流路，用 0.1mol/L 硝酸清洗流路，而后用 0.1mol/L NaOH清洗流路，最后用二次蒸馏水清洗，直到基线稳定（当副高压为 -750V 时，基线在 100 单位化学发光信号为合适）。2.3 数据测量用100.0mg/L (用0.04 mol/L盐酸溶解)的盐酸环丙沙星储备液，配置浓度为0.1-10mg/L的盐酸环丙沙星标准溶液系列。标准曲线的绘制：按图一流路测量，启动泵（流速为60rpm ），将Na2SO3溶液与盐酸环丙沙星溶液混合后，通过流动泵注入作为载流的酸性硫酸铈溶液中，微弱发光仪检测及纪录发光强度信号。重新启动测量程序，开始检测。首先测量空白溶液，按相同时间间隔（15s）旋转八通阀，得到信号峰，平行测量三次，标准系列由稀到浓进行测量，操作同空白，得到一条时间-峰值图，完成检测后选择停止检测，保存，导出为 .txt 或 .Xls文件后，导入origin处理。绘制浓度-峰值标准曲线，线性拟合得浓度-峰值关系式。盐酸环丙沙星滴眼液（规格5ml：15mg（按环丙沙星计）湖北东盛制药有限公司），按标示稀释为10mg/L的浓度，按（2）操作先走空白，空白的峰值和标准曲线相近，测量理论浓度为10mg/L（按环丙沙星计）的药片，均平行测量三次，完成检测后选择停止检测，保存，导出为 .txt 或 .xls文件后，导入origin处理。读出峰值，按浓度-峰值关系式求出药片中的实际盐酸环丙沙星含量。2.4 清洗流路清洗流路（同上面方法，最后将管中二次蒸馏水全部走光，保证管不被腐蚀），关闭快门旋松蠕动泵旋钮，关闭BPCL主机。关闭电脑，洗净试剂瓶，容量瓶，清洁台面，关闭实验室电源方可离开。3结果与讨论