流式细胞仪SOP示例.doc

流式细胞仪操作规程目录 1：淋巴细胞亚群测定 2：HLA-B27测定 淋巴细胞亚群测定 (CD系列) 方法???? ?? 流式细胞仪) 原理：???? 标本采集与处理 ????受检者的准备??检查对象生活饮食处于日常状态，空腹采血。 ????采集部位??????静脉采血 抗凝剂????????EDTA抗凝血???? ????要求????1．样本量至少1ml。?? ????????????2．。????????????3．溶血样本不能用。 试剂质控品??BEKAMANCOULTER产品，未开瓶的试剂于2-8保存，可在有效期内保持稳定，稀释的试剂于2-8可稳定2周；每天校准一次：遇特殊情况随时进行校准。 仪器 ?? BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra???? 样本制备：?? 1)按照要求，分别向已编好号的试管中加入20 ul单克隆抗体和同型对照 2)分别向试管中加入混匀的100u1抗凝血。 3)混匀，避光，室温孵育20-30分钟 4)溶血：a. OptiLyse C(按说明书步骤溶血) ????????b. 使用COULTER Q—PREP制备系统 开机---显示READY灯亮---选择35SEC灯亮---开门---放入试管关门---自动进行溶血---显示READY灯亮---开门---取出试管---再进行下一个样品测定。 （*溶血前确认A/B/C管路充满并能打出液体） 5)上机测样（可根据样本情况选择洗或不洗上样） 报告结果?? ?? 报告百分数（和绝对值） 操作性能 ?? 精密度????批内五次重复CV2％???? ?? 灵敏度????500—1000个荧光素分子???? 参考值(百分数（绝对值）) ?? CD3+??60.8-75.4%(1141-1880)????CD4+??29.4-45.8%(478-1072) ?? CD8+??18.2-32.8%(393-742)??????NK????9.5-23.5%??(175-567) ?? Th/Ts??1.05-2.03 临床意义 1.T、B淋巴细胞亚群是重要的免疫状态检测指标，在肿瘤、免疫缺陷、病毒感染，自身免疫性疾病、创伤、急性感染、多脏器功能衰竭、器官移植等具有临床诊断、病情判断、治疗等价值。 临床常用Th／Ts比值来判断病人的免疫状况。 Th／Ts比值升高：表示免疫功能亢进：见于自身免疫性疾病，如SLE、类风湿性关节炎、自身免疫性溶血性贫血、重症肌无力以及HBsAg+乙肝等。 Th／Ts比值减低：表示免疫功能下降：艾滋病、病毒感染、肿瘤病人、慢活肝和活动性肝硬化、再生障碍性贫血、粒细胞减少患者。 2：NK细胞主要破坏各种肿瘤细胞和感染某些病毒、细菌的细胞，所以在抗肿瘤和防御疾病中起主要作用。NK活性减低主要见于各种恶性肿瘤、自身免疫性疾病、病毒感染、应用免疫抑制剂，疲劳综合征病人等，NK活性随年龄增长而减退。NK细胞也参与第二型超敏反应和移植物抗宿反应，白介素-2治疗后；外周血NK细胞增加。 方案（Protocol） ???? ?? ?? ???? HLA-B27测定 (流式细胞仪) ??????医院检验科 操作规程文件号： 200??年??月??日起实施 第1版 (共3页) ?????????? 本规程每2年复审一次 ?????? 复审日期：???? 年?? 月?? 日 ?????? 复审人：???????? ?????? 规程编写者：???????? ?????? 审??批??者：???????? ?????? 批准日期：???? 年?? 月?? 日 ?????? 文件分发部门和／或个人 ?????? 院档案室保管者：???????? ?????? 检验科?? 主任：???????????? ?????? 检验科???? 实验室：???????? HLA-B27测定 方法 ?? 流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特) 原理：?? 双色直接免疫荧光法。将HLA-B27-FITC/B7-PE单克隆抗体加入到全血中，与白细胞膜上相应的抗体结合，经过溶血、洗涤（和固定）等步骤后，在流式细胞仪上进行分析，测定HLA-B7阴性而HLA-B27阳性细胞的平均荧光强度和所占的百分比。?? 标本采集与处理 ????受检者的准备??检查对象生活饮食处于日常状态，空腹采血。 ????采集部位??????静脉采血 抗凝剂????????EDTA或肝素抗凝血???? ????要求????1．样本量至少1m