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生物技术实践 5-1　微生物的利用 【直击考纲】 1.微生物的分离和培养。 2.培养基对微生物的选择作用。 【重点突破】 1．微生物的分离和培养 (1)无菌技术：主要包括消毒和灭菌。 ①消毒方法：常用煮沸消毒法、巴氏消毒法。 ②常用灭菌方法：灼烧灭菌——接种环、接种针等金属器具；干热灭菌——主要针对玻璃器皿等；高压蒸汽灭菌——主要针对培养基等。 (2)如图为倒平板操作过程，操作时要待培养基冷却至50_℃左右时，在酒精灯火焰附近进行。制备固体培养基最后要将平板倒置，其主要目的是防止培养皿盖上的水珠滴入培养基造成污染。 (3)平板划线操作 (4)稀释涂布平板法：先将菌液进行一系列梯度稀释后涂布平板，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌落。如图所示： 2．培养基对微生物的选择作用 (1)培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。 (2)培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。 (3)培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物。 (4)当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。 (5)改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。 【技能点拨】 1．平板划线操作的注意事项 (1)每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌。 (2)灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。 (3)划线时最后一区域不要与第一区域相连。 (4)划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。 2．平板划线法中的“连续划线”及稀释涂布平板法中的“系列稀释”目的是一样的，都是为了保证菌种在培养基中单个分布(平板划线法中最后一次划线的末端处的菌种最纯)。 【对位训练】 临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样 本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题： (1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用____________法或____________法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。 (2)取该单菌落适当稀释，用__________法接种于固体培养基表面，在37 ℃培养箱中培养24 h，使其均匀生长，布满平板。 (3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A____________；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B____________；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明_______________________；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的____________。 (4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素__________。 答案　(1)划线　稀释涂布(或涂布)　(2)涂布　(3)敏感 不敏感　该致病菌对C的敏感性比A的弱　耐药菌 (4)A 解析　微生物纯化的方法主要为平板划线法和稀释涂布平板法。根据微生物的特点对其进行一系列浓度梯度稀释，然后用涂布法接种于固体培养基表面，然后在适宜条件下培养；抗生素是由真菌产生的，可以抑制生长、繁殖或杀死细菌等致病菌的一类物质，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明有抗生素A的地方该致病菌受到抑制；B的周围没有透明圈，说明致病菌对抗生素B不敏感，通过C的透明圈要比A的透明圈小，说明该致病菌对C的敏感性比A的弱；D出现了透明圈，说明该致病菌对D敏感，但是在透明圈上出现一个菌落，又排除杂菌污染，判断此菌落的微生物对抗生素D产生了耐药性。根据以上分析，为达到抗菌的目的，最好选用抗生素A。 2．请回答下列与微生物有关的问题： (1)微生物的分布：能降解某种除草剂(一种难以降解的含氮有机物)的细菌主要分布在________的土壤中。 (2)微生物的消毒和灭菌：在菊花组织培养中，对外植体常用________________和氯化汞进行消毒；在微生物培养中，对培养基常用______________法进行灭菌。 (3)微生物的应用：在葡萄酒的自然发酵过程中，运用吸附在葡萄皮上的野生型________发酵产生酒精。 (4)微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是下面图示中A、B两种方法。常用来统计样品活菌数目的方法是[　]________________。 (5)微生物的计数：运用活菌计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是__________________。