精品课程项目三培养基的配制咸宁职业技术学院课件..ppt

培养基的配制 一、培养基的成分 1、无 机 盐 2、有 机 物 3、植物激素 （1）生长素类 种类：NAA(萘乙酸)、IAA(吲哚乙酸)、IBA(吲 哚丁酸)、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸) 作用：促进细胞伸长生长和细胞分裂，诱导形成愈伤组织，促进生根。 浓度：0.05－5mg/L 3、植物激素 （2）赤霉素（GAs）　 种类：GA3 作用：主要用于诱导离体芽的萌发和伸长。 注意：不耐热。 3、植物激素 （3）细胞分裂素（CTK） 种类： KT(激动素)、6-BA(6-苄基腺嘌呤)、 ZT(玉米素)、2ip(异戊烯氨基嘌呤) 作用：促进细胞分裂，诱导芽的形成和丛 芽产生. 浓度：0.05－10.0mg/L 3、植物激素 （4）脱落酸（ABA）：其作用与赤霉素相反,能促进芽和种子进入休眠状态,促进短日照的植物提前开花. （5）乙烯： 乙烯对组织培养物的影响： 组培中植物组织会释放少量乙烯，对培养物的生长、胚的发生和芽的分化有抑制作用. 克服方法：1.降低培养基中蔗糖的浓度或用葡萄糖、麦芽糖代替蔗糖；2.在培养基中加入5-15mg/L的硝酸银也能控制乙烯的形成。 4、培养体支持材料 5、辅助性物质 MS培养基 无机盐浓度高 高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐 含有一定数量的铵盐 营养丰富 不需要添加更多的有机附加物 Miller培养基 无机元素用量是MS的1/3－1/2 微量种类少 无肌醇 White培养基 无机盐浓度较低 使用广泛 在生根培养、胚胎培养中有良好的效果 B5培养基 含较低的铵，硝酸盐和盐酸硫胺素用量较高。 适合双子叶植物， 尤其木本植物组培。 SH培养基 特点与B5相似，硫酸铵改用磷酸二氢铵。 无机盐浓度较高 N6培养基 成分简单 硝酸钾和硫酸铵含量高 适合花粉、花药培养 二、培养器皿的清洗 1、洗涤场所及用具： 场所：洗涤室 用品：水池、塑料盆、塑料桶、下水用过滤网，各种规格刷子。 2、洗涤液： 洗衣粉 洗洁精 高锰酸钾 稀盐酸 重铬酸钾+浓硫酸混合液 3、洗涤标准： 透明锃亮，内外壁水膜均一，不挂水珠。 三、培养基母液配制 （二）母液配制方法 1、营养成分的配制 根据药品性质将母液配制成以下四类： （1）大量元素 可以混在一起配制成10—20倍液，注意离子之间沉淀，如Ca2+和S042-，Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定要分别单独配制充分溶解再放入母液中。 1、营养成分的配制 （2）微量元素 可配成100—200倍混合母液。 （3）铁盐 硫酸亚铁和EDTA钠盐易沉淀，需单独配制，配成100—200倍鳌合剂不易沉淀。 （4）有机化合物 维生素、肌醇、氨基酸等一起配成100或200倍液，也可分别配制。 2、植物生长调节物质的配制 植物生长调节物质分别配成母液储于冰箱，浓度一般为0.5－1mg/ml。 IAA、IBA、GA等先溶于少量的95％的酒精中，再加水定容。 NAA可先溶于热水或少量95％的酒精中，再加水定容。 2，4-D可用少量0.1mol/L的NaOH溶解后，再加水定容。 2、植物生长调节物质的配制 KT和BA先溶于少量0.1mol/L的HCI中再加水定容。 玉米素先溶于少量95％的酒精中，再加热水到一定浓度。 （三）配制时注意事项 ＭＳ培养基母液的配制 （一）培养基制作流程 1、按大量元素、微量元素、铁盐、有机成分顺序将母液取出，混合。母液取用量的计算。 制备培养基时母液取用量（ml）=1000÷浓缩倍数×制备培养基数量（L） 2、适量蒸馏水放入加热容器，蒸馏水应少于所制培养基数量，约终体积的2/3-3/4，接通电源加热。 3、向加热容器中加入称量好的琼脂。搅拌加热，至完全溶化。 （一）培养基制作流程 4、琼脂熬化后，称取相应量的蔗糖，加入加热容器中至溶解。 5、将母液混合液加入到加热容器中，搅拌混匀。 6、蒸馏水定容至所需体积。 7、测试培养基溶液的PH值，过高滴加0.1mol/L的HCL调整，过低滴加0.1mol/L的NaOH调整，调成pH值5.8左右。 8、迅速分装到培养瓶中，封口灭菌备用。 （二）培养基灭菌 培养基分装封口后立刻进行灭菌，至少在24h内完成灭菌程序。 一般采用的是高压湿热灭菌，要求压力0.105MPa（温度121℃）时,保持15-20分钟。 某些激素、维生素采用过滤灭菌。 （三）培养基的保存 确定培养基 称量 计算 溶解 分装 定容 贴标签 保存 （一）母液备制流程： 准备工作 3、药品用量的计算 配制母液时药品用量(mg)=配方用量(mg)×浓缩倍数×制备容量（L） 1