[染色体核型分析技术原创.ppt

从染色体玻片标本和染色体照片的对比分析，进行染色体分组，并对组内各染色体的长度、着丝点位置、臂比和随体有无等形态特征进行观测和描述，从而阐明生物的染色体组成，确定其染色体组型，这种过程称为染色体组型分析。 因其实用性，已成为染色体异常的常规筛选技术。 相关概念 人类染色体核型分析标准是丹佛（Denver）体制（人类有丝分裂染色体命名体制）。该体制规定： 1.每一条染色体可通过相对长度、臂率和着丝粒指数等三个参数予以识别； 每条染色体长度 相对长度=——————————————×100% 22条常染色体+X的总长度 短臂指数 着丝粒指数=————————×100% 该染色体长度 长臂长度 臂率=——————×100% 短臂长度 人类的46条染色体根据长度递减顺序和着丝粒位置划分为7个易区分的组，即以字母A~G表示7组染色体，并决定将副缢痕和随体作为识别染色体的辅助指标。 核型的表示方法： 正常男性核型：46，XY 正常女性核型：46，XX 非显带的染色体： 染色体标本制作好后，不经处理直接染色，整条染色体均匀着色（相对于后面的显带染色体而言）。 染色体编号(人X染色体) 记述一特定带时，需要写明4个内容：染色体号，长短臂，区的号序和带的号序。这些内容按顺序写，不用间隔或加标点。如果某一带被再细分，在原带号数后加一小数点，编号原则仍按从着丝粒往臂端序贯编号。如1p31.2代表一号染色体短臂3区1带第2亚带 核型描述 首先列出染色体总数，然后是性染色体组成，接着列出异常的染色体数目或形态。下列统一的命名符号： A-G 染色体组的名称 1-22 染色体编号 X,Y 性染色体 del 缺失 der 结构重排的染色体 dup 重复 inv 倒位 t 易位 +/- 在染色体符号前表示染色体增加或减少，在染色体符号后表示染色体多出或缺少一部分 GRQ带技术 人类染色体用Giemsa染料染色呈均质状，但是如果染色体经过变性和(或)酶消化等不同处理后，染色可呈现一系列深浅交替的带纹，这些带纹图称为染色体带型。 显带技术就是通过特殊的染色方法使染色体的不同区域着色，使染色体在光镜下呈现出明暗相间的带纹。 这种带对每一条染色体来说都是独特的，可以区分和确认每一条染色体。 显带方法： G-显带：是最常用的方法。标本经胰蛋白酶处理后，应用Giemsa染色，镜检、分析,显示深染和浅染相间的带纹。 优点：G带在各条染色体上显出的带型和Q带型基本相同 ，普通显微镜下可以观察 除G显带、R-显带外还有： Q-显带：荧光显带，同G显带带纹。 T-显带：末端显带。 C-显带：着丝粒显带。 新技术的应用使人们能够观察到前中期染色体，比中期染色体更伸展，这样观察的分辨率更高，可显示550~850条带，即高分辨染色体。 荧光原位杂交技术 荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization FISH)是在20世纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术，以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法，探针首先与某种介导分子结合，杂交后再通过免疫细胞化学过程连接上荧光染料。 FISH的基本原理是DNA(或RNA)探针用特殊的核苷酸分子标记，然后将探针直接杂交到染色体或DNA纤维切片上，再用与荧光素分子耦联的单克隆抗体与探针分子特异性结合，来检测DNA序列在染色体或DNA纤维切片上的定性、定位、相对定量分析 流程 FISH样本的制备→探针的制备→探针标记→杂交→染色体显带→荧光显微镜检测→结果分析。 特点 FISH技术作为非放射性检测体系，具有以下优点:1、荧光试剂和探针经济、安全；2、探针稳定，一次标记后可在两年内使用；3、实验周期短、能迅速得到结果、特异性好、定位准确；4、FISH可定位长度在1kb的DNA序列，其灵敏度与放射性探针相当；5、多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色可同时检测多种序列；6、既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化，也可以在悬液中显示间期染色体DNA的结构。 缺点：不能达到100%杂交