原子吸收光谱法(本)解析.ppt

同步扫描技术 根据激发和发射单色器在扫描过程中彼此间所保持的关系，同步扫描可分为固定波长差(??)和固定能量差及可变波长三种； 同步扫描技术可简化光谱，谱带变窄，减少光谱重叠，提高分辨率； 如图。 合适的??可减少光谱重叠； 酪氨酸和色氨酸的荧光激发光谱相似，发射光谱严重重叠，但??15nm的同步光谱只显示酪氨酸特征光谱； ??60nm时，只显示色氨酸的特征光谱，实现分别测定。 可获得三维光谱图的仪器 可获得激发光谱与发射光谱同时变化时的荧(磷)光光谱图 荧光分析的特点： 灵敏度高：视不同物质，检测下限在0.1~0.001?g/mL之间。可 见比UV-Vis的灵敏度高得多！ 选择性好：可同时用激发光谱和荧光发射光谱定性。 结构信息量多：包括物质激发光谱、发射光谱、光强、荧光量 子效率、荧光寿命等。 应用不广泛：主要是因为能发荧光的物质不具普遍性、增强荧 光的方法有限、外界环境对荧光量子效率影响大、干扰测量的 因素较多。 6.2共振瑞利散射光谱 一 共振瑞利散射的形成： 光散射是指光通过介质时在入射光方向以外的各个方向上所观察到的发光现象。介质分子由电子和原子核组成。光电磁波的电场振动导致分子中电子产生受迫振动形成偶极子。根据电磁理论，振动着的偶极子是一个二次波源，它向各个方向发射的电磁波就是散射波。 光散射与介质的不均匀性有关。根据介质中粒子大小不同，散射可分为Tyndall散射和分子散射。当粒子的尺寸大于入射光波长(λ0)时发生反射并服从反射定律。如果介质中粒子直径(d )与入射光波长相近，便产生Tyndall散射；如果介质中粒子很小， d ≤0.05 λ0时便产生以Rayleigh散射为主的分子散射，分子散射比Tyndall散射弱得多。 二 共振瑞利散射的测定原理：在普通荧光分光光度计上选择合适的激发和发射通带宽度，采用相等的激发和发射波长同时扫描激发和发射单色器所得的同步光谱(△ λ=0)即为散射粒子的散射光谱。 三 共振瑞利散射的应用 1核酸的分析 基于带正电荷的染料(如酞青染料)与DNA的磷酸根之间的静电作用导致染料在DNA分子上聚集，以及金属络合物和季铵盐类与DNA作用产生增加的共振瑞利信号，建立测定DNA含量的方法。 2蛋白质的分析 在静电作用为主的体系中，当溶液的pH小于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电荷。阴离子染料与蛋白质之间通过静电作用形成蛋白质-染料的复合物，染料在蛋白质分子上堆积形成较大的粒子，因而产生强烈的共振瑞利散射信号。利用此现象可对蛋白质进行分析测定。 3 溶液中蛋白质分子构象变化的推测 第一章 光谱分析基础 电磁辐射和电磁波谱 原子光谱和分子光谱 吸收、发射及散射光谱 仪器分析方法的评价 光谱分析在医学中的应用 光学光谱分析 构成物质系统的分子、原子或离子经辐射能照射后总能量会发生变化，向环境吸收或释放一定的能量转化成某种波长的辐射信号便可进行分析。 根据吸收的辐射信号或发射的辐射信号强度变化量多少进行的分析，即谓光谱分析 以此实验手段为基础而建立分析方法的一门学科，广义上都称光谱分析法 光谱分析以测定物质发射或吸收辐射能的波长和强度为基础。 光谱分析三个基本过程： （1）能源(光源)提供能量； （2）能量与被测物之间的相互作用； （3）产生信号。 光谱分析三个基本特点： （1）所有光谱分析法均包含能量（光源）,被测物（样品）及信号三个基本过程； （2）对特定波长的谱线选择性测量，仪器装置中不涉及混合物分离（不同于色谱分析）； （3）涉及大量光学元器件。 一 电磁辐射 11电磁辐射：高速穿过空间的一种能量，即光子流,简称为光,其最小单位是光子。 电磁辐射的能量与其波长关系为： E = hν = h c /λ = h c σ c：光速2.9979×1010cm*s-1；ν：频率； E ：能量； h：普朗克常数6.626×10-34J*s 2 产生一定能量的波长计算为： λ = h c / E λ:波长 单位: m:1 dm:0.1 cm:0.01 mm:001 μm:10-6 nm:10-9 pm:10-12. 不同波谱区的波长数量级相差很大,往往采用的单位不一样。 普朗克观点： 1），物质分子或原子吸收或发射的能量不连续（量子化）。 2），物质分子或原子吸收或发射的辐射能完全等于两个能级之间的能量差。 ?E =E1-E0= h? = h c /λ