[DB33T624-2006动物组织中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺残留量的测定气相色谱-质谱法.docVIP

前 言 本标准是在参阅了国内外文献的基础上，根据我国技术发展水平研究制定的，建立了气相色谱-质谱法测定动物中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等4种β2-兴奋剂残留。 本标准由浙江省农业厅提出并归口。 本标准浙江省畜产品质量安全检测中心浙江省疾病预防控制中心。 本标准主要起草人： 动物组织中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺残留量的测定 气相色谱-质谱法 范围 本标准规定了气相色谱－质谱（GC－MS）法测动物组织中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等4种β2-兴奋剂残留方法。 本标准适用于组织中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等4种β2-兴奋剂残留。方法检测限为特布他林1.0μg/kg、克伦特罗2.0μg/kg、沙丁胺醇1.0μg/kg、莱克多巴胺2.0μg/kg。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 方法原理 加入内标，用甲醇提取离子交换固相萃取柱，N，O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺（BSTFA）衍生于气相色谱－质谱仪上进行测定。内标法定量。 试剂和溶液 为去离子水，符合GB/T 6682二级水的规定 甲醇乙酸乙酯氨水 盐酸 mol/L盐酸溶液：取盐酸（4.4）mL，加水至0mL，摇匀，即得。 30mmol/L盐酸溶液：取mol/L盐酸溶液（4.5）mL，加水至00mL，摇匀，即得。无水硫酸钠：450℃干燥2h，备用正己烷甲苯衍生剂：N，O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺（BSTFA）％氨水/乙酸乙酯溶液：取氨水mL加乙酸乙酯至10mL，充分混匀，即配即用。SLS阳离子交换固相萃取柱：每根柱填料量为00mg，柱体积5mL。 标准品特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺，纯度98%。 同位素D9-克伦特罗D3-沙丁胺醇β2-兴奋剂标准储备液：取特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺标准品（4.1）mg，SLS阳离子交换固相萃取柱置mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，其浓度为mg/mL，置-20℃冰箱中，期为6个月。 β2-兴奋剂混合标准工作液：吸取适量的β2-兴奋剂标准储备液（4.1），用甲醇稀释成特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺μg/mL的混合标准工作液，置℃～8℃冰箱中，期为个月。 β2-兴奋剂内标工作液：吸取适量的β2-兴奋剂（4.1），用甲醇稀释成D9-克伦特罗D3-沙丁胺醇1.0μg/mL混合内标工作液，置℃～8℃冰箱中，期为个月。 仪器设备仪配有电子轰击（EI）源离心机r/min或以上。 组织绞碎机r/min或以上。 分液漏斗：125 mL。 具塞试管5mL，10mL。 涡旋混合器 分析天平0.00001g，0.01g。 超声波清洗器 离心管50mL，10mL。 氮吹仪μL～200μL，100μL～1000μL。 分析步骤℃冰箱中称取g（精确到0.01g），置于50mL离心管中，加β2-兴奋剂内标液（）50μL甲醇mL，r/min以上均质60s，加盖，于60℃超声波清洗器中超声20min取出冷却后00r/min离心10min，倾出上清液中，另甲醇mL重复提取一次，合并上清液60℃下氮气吹至mL以下；加0.2mol/L盐酸000r/min离心0min，分出上清液。 依次用甲醇mL、水5mL、30mmoL/L盐酸溶液5mL润洗阳离子交换固相萃取柱取6.上清液过柱，弃去流出液，用水5mL和甲醇5mL柱子，用％氨水/乙酸乙酯溶液10mL洗脱，收集无水硫酸钠，氮吹干加乙酸乙酯5mL，置于超声波清洗器中超声min，5000r/min离心5min，分出上清液至5mL具塞玻璃试管中，氮吹至干干。 衍生 吹干加入甲苯（4.）1μL和（4.）μL，加后于涡旋混合器混匀，℃±5℃的烘箱中，加甲苯0.mL溶解GC-MS分析。另取β2-兴奋剂混合标准工作液（4.1）适量，加β2-兴奋剂内标工作液（4.1）50μL，加乙酸乙酯5mL后，氮气吹干，同步进行衍生化。 6.5.1色谱条件 色谱柱：5%苯基甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm)，或； 进样口温度：280℃； 柱温程序：初温120℃，保持3 min，然后以10℃／min升至20℃，保持min，再以0℃／min升至0℃保持min； 载气：高纯氦气（99.999%）； 流速：1.0mL/min，不分流进样进样量：2.0μL。 6..2质谱条件 EI源：源温230℃；