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科技论文 课 程 综 述 题目：几种植物转基因表达载体 的构建方法 姓名: 保勇 学院： 农学院 班级: 生物技术102班 学号: 103135202 几种植物转基因表达载体的构建方法 作者：保勇 指导老师：郭庆元 摘要 ：表达载体的构建在植物基因工程研究中占据重要地位直接关系到目的基因的表达效果，本文比较分析了5种不同载体构建方法的特点，给出了不同载体构建方法的适用性建议，在构建多片段连接的复杂的大载体时采用相应的复杂载体构建技术在已获得无选择标记的转基因植株时采用三段T-DNA构建方法构建载体在做基因功能验证时采用的Gateway技术非常简单的载体构建可以采用传统的酶切连接的构建方式。现在的主流构建载体方式是利用结合其他手段Gateway技术未来载体的发展趋势将是无酶连接。 关键词：载体构建：Gateway技术三段：T-DNA Approaches of Constructing Expressional Vectors Utilized in Plant GeneticTransformation Name:BAO Yong Abstract ：Construction of Expression Vector occupy an important position is directly related to the effect of target gene expression in plant genetic engineering, comparative analysis of five different vector construction method is characterized by given different vector construction applicability of the method recommended, build morecomplex large vector fragment connection when using the corresponding complex vector construct technology has marker-free transgenic plants using three sections of T-DNA build method to build carrier do gene function validation using the Gateway technology is very simple and the carrier buildenzyme digestion and ligation built. The the mainstream build carrier is using Gateway technology in combination with other means of the development trend of the future carrier enzyme-linked. Key words :construction ; vector ; gateway ; three T- DNAs ; 　在植物基因工程研究中,载体是携带靶DNA 片段进入宿主细胞进行扩增和表达的媒介,没有载体,目的基因无法进入受体,即使进入受体细胞也无法表达[1] 。细菌质粒载体或噬菌体载体连接启动基因及多聚核糖体的基因序列就组成了表达型载体。表达载体的构建是一项非常重要但又比较繁琐的工作,因此,对研究表达载体的构建方法具有重要现实意义。 随着植物基因工程技术的发展,适合于不同研究目的各种载体系统应运而生,其中在转基因植物中最常用的是质粒载体。在为某种特定的植物构建表达载体时,为了使外源基因高效、安全表达,或由于特定的要求,需要构建新载体或改造已有载体,而选择一种合适的载体构建方法,从而达到方便、快捷的目的就显得十分重要。鉴于目前还没有关于对载体构建技术方面的总结,在收集整理前人工作的基础上,本文选择介绍了其中几种具有代表性的策略,对其适用的情况作了阐述,进而指出它们的应用潜力和主要应用领域,期望对实际操作起到借鉴作用。 1 植物表达载体构建 植物基因工程包括的主要环节有：目的基因的克隆和分离，基因的修饰和转化载体的构建，植物的遗传转化，转基因细胞或植株的筛选，通过有性繁殖将目的基因持续稳定的遗传给后代。载体的构建过程中重要的是DNA的操作。 根据植物工程载体的功能和构建过程，可将载体分为四类：（1）目的基因的克隆载体，主要是多拷贝的E.coli小质粒。（2）中间载体，主要是复制和扩增基因。（3）卸甲载体，包括Ti质粒和R质