BKV病毒的检测（参考）.ppt

BK病毒的检测 1971年，在肾移植接受者的尿液样本中首次发现； 多瘤科病毒，BKV、JCV 及 SV40是目前所知的多瘤病毒家族所有成员； 人体的肾、肺、眼、肝、脑等器官都可作为BK病毒的生长部位，并引起相关的疾病； 无包膜，含有二十面体、直径45nm的衣壳，病毒基因组为5300bp的环形双链DNA。其基因组可分为调控基因、早期基因、晚期基因三部分； 许多证据表明，BK病毒与出血性膀胱炎、肾炎相关，BK病毒容易侵犯免疫缺陷患者，特别是实体器官移植和骨髓移植的接收者。 BK病毒简介 在儿童早期病毒血清阳性率60％~100％。原发性 BKV感染常发生于4~5岁时，成年人抗体阳性率为46%~94% ； 儿童感染一般无症状，典型症状是发烧和非特异性上呼吸道感染； 初次感染后，此病毒在正常人体内呈潜伏状态，在器官移植病人中，BKV病毒经常激活导致疾病； 传播途径：暴露的体液，例如唾液，或是通过胎盘传播。 BK病毒简介 感染肾：表现为出血性膀胱炎（出血性膀胱炎则增加住院时间和病人死亡率）、非出血性膀胱炎、输尿管狭窄和肾炎； 感染肺：肺炎和急性非特异性上呼吸道感染； 在各种肿瘤样本中检测到BKV病毒，主要是神经胶质和神经元脑瘤； 中枢神经系统疾病； 到目前为止，关于眼部感染仅有的报告为双侧非典型视网膜炎。 BKV相关疾病 免疫抑制状态下，潜伏在体内的BKV可再次激活； 肾移植术后BKV再次激活发生率高：10%~68%，BKV相关肾病患病率：1~7%； 移植肾丧失功能几率高：50% 的BKVN会导致移植肾失功； BKV和JCV具有75% 的同源性，区分BKV和JCV还是非常重要的，因为JCV很少引起多瘤病毒相关肾病，与肾脏损伤不相关。 BKV感染在临床上经常被误诊为急性排斥或是药物毒性。 BK病毒相关肾病 BKV相关肾病筛查、诊断、干预 Deepali Kumar , Atul Humar ,et.al. The AST Handbook of Transplant Infections,1st edition. 2011,51-54. 尿液 BKV-DNA 荧光定量pcr法 VS 尿液 Decoy细胞 人员要求不高，易于培训 灵敏度高、特异性强 可实现自动化，客观性强 重复性好 需要有经验的病理学专家，主观性较强 依据形态不能区分BK病毒和其他病毒感染，例如：JCV 灵敏度低特异性差 美国器官移植手册建议：肾移植后，成人两年内至少每3个月检测一次；儿童前六个月每月检测一次，两年内每3个月检测一次； BKV-DNA浓度＜107 copies/mL ，建议三个月内复查。 BKV-DNA浓度＞107 copies/mL，建议检测BKV病毒血症。 BK病毒尿是病毒开始活动复制的第一标志。 早期检测对控制BK病毒的复制，早期干预具有重大意义。 研究发现，尿BKV阳性出现在血BKV阳性之前，约有33％的肾移植受者中会发现有BK病毒尿症。 尿液BKV-DNA检测 注：拷贝数阈值可以根据所使用的测定法而变化 Deepali Kumar , Atul Humar ,et.al. The AST Handbook of Transplant Infections,1st edition. 2011,51-54. 所谓 decoy 细胞指脱落尿中的含有病毒包涵体的移行细胞。在沉渣尿涂片巴氏染色下, decoy细胞很容易辩认。 含病毒包涵体的细胞核有三种表现:典型最多见为不透明的毛玻璃(或冻胶)样改变,或颗粒状嗜硷性包涵体占据整个细胞核,周围无明显的晕圈;或仅核周围存在高密度的染色质;少见可出现鹰眼样改变即核中央出现着色过深的包涵体。 尿细胞学检测与尿液BKV-DNA 荧光定量PCR对BKVN的筛选一样具有重要临床意义，但是灵敏度和特异性较低。 尿液 Decoy细胞检测 在组织学检查阴性而PCR阳性的病人最终约有半数以上病人发展为BKVAN ,一般认为从血PCR阳性到组织学证实BKVN有一个数周至数月的窗口期。 PCR法检测血浆BKV-DNA VS 组织活检 方法 PCR法血浆BKV-DNA 组织学活检 优点 能够实时反映病毒感染的状态，无窗口期 抽取病人外周血即可，无需肾穿刺 BKVN确诊金标准 可鉴别排斥反应 缺点 无法确诊 有一个数周~数月的窗口期 需要取肾穿刺标本，具有创伤性 美国器官移植手册建议：肾移植后，成人前3个月至少每月检测一次，之后两年内每3个月检测一次；儿童前六个月每月检测一次，两年内每3个月检测一次； 浓度＜104 copies/mL,一个月之内重复检测；推荐减少免疫抑制剂用量，建议进行活检。 浓度＞104 copies/mL，推荐减少免疫抑制剂用量。至少每两周检测一次血浆BKV-DNA，建议进行移植物活检。 监测血浆中