非发酵菌-200.ppt

非发酵菌及检验 华中科技大学同济医学院 附属协和医院检验科 曾 吉 一. 概论 非发酵菌(nonfermenters)是指一群不利用或仅以氧化形式利用糖类的革兰阴性无芽胞杆菌, 需氧或兼性厌氧. 基本特点: 1. 大多数为机会致病菌; 2. 存在于自然环境; 3. 多为正常菌群的一部分; 4. 对很多抗生素有天然的抗药性。 近几年，从临床标本中分离的非发酵菌的比例逐年上升，目前已经约占分离的阴性菌的40%。 非发酵菌的耐药性一般情况下都比肠杆菌科细菌明显，常常表现为多重耐药性，并且耐药性发展很快。 非发酵菌菌病原学分类 假单胞菌属：代表菌为铜绿假单胞菌； 不动杆菌属：代表菌为鲍曼不动杆菌； 窄食单胞菌属：嗜麦芽窄食单胞菌； 伯克霍尔德菌属：洋葱伯克霍尔德菌； 产碱杆菌属：木榶氧化 其他菌属等 非发酵菌与其他细菌的区别 1. 与其他阴性杆菌的区别: 肠杆菌，弧菌科等 2. 与易脱色的革兰阳性菌区别. 辨认非发酵菌的基本方法 1. 在克氏铁琼脂（KIA)上为K/K； 2. 大多数氧化酶阳性； 3. 细菌多不能在麦康凯平板上生长或生长不良. 非发酵菌的初步分群 1. 葡萄糖的利用; 2. 麦康凯平板上生长能力; 3. 氧化酶; 4. 动力. 非发酵菌各菌属间的鉴别 第 一节 假单胞菌属 (Pseudomonas) 一、 概述 　1. 分类 　2. 临床意义 　3. 微生物特性 　4.微生物检验 　 (1)检验程序 　 (2)鉴定 　 (3)药物敏感性试验(Antibacterial Susceptibility Test) 1.分类 假单菌属按rRNA同源性分为5群及未确定rRNA同源群有关的种 一群需氧、不发酵葡萄糖 无芽胞，有鞭毛 氧化酶阳性的革兰阴性杆菌 多为条件致病菌 2.临床意义 假单胞菌属分布广泛，人类不发酵菌感染中，假单胞菌超过50％，其中主要为铜绿假单胞菌. 3.微生物特性 革兰阴性、无芽胞、专性需氧 有端鞭毛或丛鞭毛 生长温度范围广，最适生长温度为35℃ 产生各种水溶性色素：绿脓素、脓玉红素、荧光素、脓褐素 对理化因素耐受性较强，对多种抗生素耐药 二. 铜绿假单胞菌 生物学特征： 1：形态和染色; 革兰阴性，长短不一 单鞭毛 生长温度25～42℃ 菌落形态： 常见有5种菌落形态： 典型菌落：菌落呈灰绿色，扁平湿润，边缘不规则，表面常可见金属光泽； 大肠菌样型：圆形凸起，灰白色半透明； 粘液型：菌落光滑呈粘液状 侏儒型：细小，无光泽的半透明状菌落； 粗糙型：中央凸起，边缘扁平，表面粗糙。 有生姜味 可产生多种色素： 荧光素与绿脓素 3.微生物检验 （1 ）分离培养与鉴定： 标本可接种于血琼脂平板培养基和选择性培养基 鉴定根据镜下特征、菌落形态、生化反应等 铜绿假单胞菌的最低鉴定特征 （2）抗原检测：血清学分型、噬菌体分型 （3）核酸检测：质粒指纹图分析、脉冲场凝胶电泳分析（PFGE pulsed field gel electrophoresis）、基因芯片、PCR技术、16SrDNA分型鉴定技术 铜绿假单胞菌的耐药性 耐药机制： ①产酶：金属酶，OXA酶 ②外膜蛋白的改变（Outer membrane proteins，OMP） ③主动泵出机制：对喹诺酮类，　 　　MexA-MexB-OprM及MecC-MexD-Oprj ④整合子：1类，3类 其他假单胞菌 1.荧光假单胞菌： 特点：4℃生长 2.恶臭假单胞菌： 特点：产荧光素，4℃和42℃不生长， 不产绿脓素 3.斯氏假单胞： 特点：42℃生长，精氨酸双水解酶阴性 不动杆菌属 共同特征: 氧化酶阴性, 不发酵糖类, 无动力，硝酸盐试验阴性。 生物学性状: 1. 形态: 革兰阴性杆菌，多为球杆状，常见成对排列无芽胞，无鞭毛。 2. 培养特性: 专性需氧菌, 最适生长温度为35℃，营养要求不高，麦康凯、血平板均生长。 不动杆菌属主要菌种系列生化特征 鲍曼不动杆菌 临床意义： 鲍曼不动杆菌分布广泛，特别是在医院环境中广泛存在，极易引起医院感染的发生，最近几年，在国内很多大型医院ICU病房，鲍曼不动杆菌的分离率已经占到第一位。 抵抗力强，耐药性强 容易引起院内传播：消毒隔离、洗手 感染危险因素： 长期住院，入住ICU 高龄，伴基础疾病 移植、免疫抑制 插管、人工通气 事先用过抗生素 生物学性状: 1. 形态: 革兰阴性杆菌，球杆状，无鞭毛。 2. 培养特性: 专性需氧菌, 最适生长温度为35℃，42 ℃能生长，营养要求不高，麦康凯、血平板