丹酚酸B盐对转化生长因子..doc

丹 酚酸 B 盐 对转 化生 长 因子一』 31 刺激肝 星状 细胞 活化 与胞 内信 号转 导 的作用 刘 成 海 刘 平 胡 义扬 朱 大 元 【摘要】 目的 探讨丹酚酸 B 盐 (SA —B )抗肝纤维化的作用机理 。方法 分离大 鼠肝星状细胞 (H SC )，于无 包 被 的塑 料培 养皿 上 原代 培养 1、4 、7 d ，细 胞分 别 处 于 静 止 、中 间活 化 与完 全 活 化 3 种 活 化状 态 。予 以 100 pm ol／L 转 化 生长 因 子 8l(TG F-~1)刺激 ，观察 细 胞 a一肌 动 蛋 白 表达 与胶 原 分 泌 的变 化 。选择 对 TG F-~I 刺 激最 为 敏 感 的 中 间 活 化 状 态 H SC 为 细 胞 模 型 ，[ H ]胸 腺 嘧 啶掺 人 法 观 察 0 ．1 gm ol／L ～1 m m ol／L SA —B 对 该 细胞增 殖 的作 用 ，倒 置 显微 镜 观 察 药 物对 细胞 形 态 的影 响 ；W ester n 印 迹 与 Norther n 印迹等 方法 观 察 sA ．B 对 TG F-131 刺激 活化 的 H SC 胞 外 基质 基 因与 蛋 白表 达 、a一肌 动 蛋 白表 达 的影响 ；提取 细胞 质 与细 胞核 蛋 白 ，W ester n 印迹 方 法观 察 sA ．B 对 TG F-131 刺激 的 H SC Sm ad2／3 蛋 白 表达 、磷 酸化 与 核 转 位 的 影 响。 结 果 TG F-131 促 进 各 活 化 状 态 H SC 的 胶 原 分 泌 ，促 进 率 分 别 为 128 ．6 ％ 、207 ．3 ％与 188 ．2％ ，中间活化 状 态 H SC 对 TG F-~I 的促 胶 原分 泌最 为 敏感 。除 0 ．1 m m ol／L ～1 m m ol／L SA —B 引起 部 分细 胞死 亡 外 ，0 ．1 gm ol／L ～10 ／unol／L SA —B 对 细胞 形 态无 影 响 ，但可 浓 度 依 赖 性 地抑 制细 胞增 殖 ，细 胞 内 [ H ]胸 腺 嘧 啶掺 人量 分 别 为对 照组 的 76 ％ 、60 ．1％与 47 ．8％ 。 1 gm ol／L ～10 tm lol／L SA —B 明显抑 制 TG F-~I 刺 激 的 H SC 胶 原分 泌 量 (分 别 为对 照 组 的 68 ．6％ 与 56 ．1％ )，抑 制 a_肌 动蛋 白与 纤维 蛋 白酶原 激 活 物 抑 制 子 蛋 白表 达 ，下 调 I 型前 胶 原 基 因表 达 。0 ．1 gm ol／L ～10 gm ol／L SA —B 不 同程度 地 抑制 Sm ad2／3 的蛋 白表 达量 ，明显 抑制 Sm ad2 蛋 白胞 内磷 酸化 与核 转位 。结论 sA - B 抑制 TG F-131 的 H SC 胞 内信 号转 导 ，从 而 拮抗 T GF一91 的促 H SC 活 化 ，以 上 作 用是 sA ．B 抗 肝 纤 维 化 的 主 要 机 理 。 【关键词】 肝硬化 ； 丹参 ； 受体 ，转化生长因子．8； 信号传递 E f f ec ts o f sa lvian olic acid - B o n T G F - stim u la ted h epa t i c stel l ate cell act i va t i on an d its in tra cel lu lar 曲唾 u U C} ’，u U P ing ，H U Yiyang ，zH U Dayuan． lm ti tute of Liver D iseases 。Shanghai University o f Traditional Chinese M edwine，Sh a n g h a i 200032 ，C h ina 【A l~ traet 】 O bjective To investigate hepatic stellate cells (H SC ) responses at dif ferent dif fer e ntiation stages on transform ing growth fl act0r_p1，and to elucidate the m echanism s of salvia n olic acid - B (SA—B )，a w ater s0luble com p o und from Sd vm m iltiorrhiza ，against hepatic f ibrosis，r e lating to inter fer e nce w it h