CM1850-冷冻切片机使用体会解析.ppt

* Leica CM1850 冷冻切片机的使用体会 组员： 李丹 吴哲 侯宇华 一.总述 冷冻切片是借助在低温的条件下，使组织迅速冻结达到一定硬度进行切片的一种方法。冷冻切片技术距今已近有100 多年的历史，适用于新鲜样品的切片，包括动物的器官如：心、肝、肾等；也可用于植物器官的切片，如根、茎、叶等。与石蜡切片比，其优点在于快速、方便，切好的片可直接染色处理。因此，制作一套高质量的冷冻切片对于确保生物分析的科学性、可靠性是极其重要的。如今，绝大多数的科研单位都有国产或国外的冷冻切片机，冷冻切片已经成为日常工作中不可或缺的一部分。 二.切片机使用原理 冷冻切片是借助低温使组织冻结达到一定的硬度并通过冰起支撑作用来进行切片的一种方法。 速冻 可减小冰晶直径，避免组织细胞损伤。 制冷 压缩机佛里昂制冷、半导体温差电制冷 三.切片机简介 1 冷冻切片机CM1850 2 废液缸 3 控制面板1 4 控制面板2 5 储存架，左侧 6 储存架，右侧 7 自动总保险丝 8 固定吸热器（附件）支架 9 快速冷冻架 10 Peltier元件（附件） 11 置物台（附件）* 12 固定吸热器（附件）* 13 标本盘 14 隔热板（附件） 15 切片废料盘 16 刷架 17 可定向的标本头 18 刀架基座（附件） 19 刀架CE（附件） 20 刀架CN（附件） 21 刀架CS（附件） 控制面板一 灯光按钮 ON/OFF开关用于冷冻箱照明。 手动除霜按钮 用于激活和终止手动除霜。 锁定按钮 锁定解锁定控制面板以避免无意修改输入的参数。 要锁定或解锁定，按下约5秒。 设置时间 设置自动除霜时间 选择冷冻箱温度 快速冷冻架的手动除霜 控制面板二 将标本远离刀片 ? 按下后标本开始向后部末端快速返回。 当标本头运动时，LED（1）闪烁。 到达后部末端时，LED（1）开始发光。 ? 可以通过按下粗进料按钮之一停止往返运动。 ? 按下后标本开始向后部末端慢速返回。 标本会向后部末端缓慢移动，只要按钮处于按下状态。 向刀片移动标本 ? 按下标本向着刀片快速或慢速移动。 只要按钮按下就进行向前的移动。 这是一项安全特性保 护标本和刀片免于损坏！ 到达前部末端时，按钮的LED（2）开始发光。 快速冷冻架 冷冻箱具有一个快速冷冻架可以放置多达10个标本盘。 快速冷冻架的温度通常都低于冷冻箱温度。 ? 将标本切至一定大小。 ? 室温下添加足量冷冻化合物与标本盘中。 ? 将标本置于盘中并定向。 ? 将标本盘置于快速冷冻架的一个孔中，在低温下冷冻标本。 ? 标本冷冻后，将标本盘插入标本头上并开始切片。 标本盘 将标本盘插入标本头 ? 将手轮的把手锁定于较高的位置。 ? 刀架和刀都到位后，用护刀器覆盖在 刃缘上。 ? 松开标本头的螺丝。 ? 将标本盘的轴插入刀标本头的定 位孔中。 确定标本盘的轴已完全插入。棱柱全部后 表面必须与标本头良好接触。 ? 重新旋紧螺丝。 标本定向 ? 要放开标本，松开螺丝。 ? 用控制杆确定标本面的方向。 ? 重新旋紧螺丝。 切片 修整标本 ? 将预冷的刀/刀片插入并固定在刀架上。 ? 调整适当的刀架间隙角。 对于大多数情况而言，调整到4°和6°之间（刀架CN和CS）或1°和2°之间（刀架CE）是合适的。 ? 将刀架/刀与标本准直。 ? 拆下护刀器（刀架CN、CS）或向左折叠玻璃防倾 导杆（刀架CE）。 ? 打开手轮。 ? 用粗进料按钮将标本移向刀片修整标本。旋转手轮 降低标本至需要的切片平面。 ? 在刀上放置防倾导杆并与刃缘准直。 切片厚度设置 通过旋转旋钮可以在1到60um的范围内调整切片 厚度： 从0-10um,1um增幅。 从10-20um,2um增幅， 从20-60um,5um增幅。 选择的切片厚度显示在切片机的指示标记上。 ? 用切片机上的控制旋钮选择需要的切片厚度。 用约20um的厚度开始切片。 ? 将切片厚度连续降低到合适数值。 从某一切片厚度变换到另一厚度时，应当舍弃前两三个切片。 ? 切片时，匀速旋转手轮。 四.方法 冷冻切片机操作方法 1.取材。 2.取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上，冰冻。 3.将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。 4.调好欲切的厚度，一般在5～10um间。 5.调好防卷板。制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。切片时，切出的切片能在第一时间顺利地通过刀防卷板间的通道，平整地躺在持刀器的铁板上。这时便可掀起防卷板，取一载玻片，将其附贴上即可。 注意事项： 1.防卷板及切片刀和持刀架