HPLC流动相的选择解析.ppt

HPLC日常维护（三） ——流动相 * 一、 液相色谱流动相的性质、要求 理想的液相色谱流动相应具有： 低粘度 与检测器兼容性好 易于得到纯品 毒性低等特征。? 1. k’值是流动相组成的函数 溶剂强度增加 溶质在填料表面的吸附减少 相应的容量因子k’降低 2. 塔板数n一般与流动相的粘度成反比。 注意: 二、流动相选择原则 ? ①流动相应不改变填料的任何性质 低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料 有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改 变色谱柱填床的性质。 碱性流动相不能用于硅胶柱系统。 酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附 剂的柱系统。? ? ②纯度 色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。 ③必须与检测器匹配。 使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。 使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。? ④粘度要低（应2cp） 粘度太高时： 会影响溶质的扩散、传质，降低柱效； 还会使柱压降增加，使分离时间延长； 最好选择沸点在100℃以下的流动相。 三、液相色谱流动相的pH值 ?1.反相离子抑制技术： 采用反相色谱法分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱 碱（7≤pKa≤8）样品时，通过调节流动相的 pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在 固定相上的保留，并改善峰形的技术。 对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k’值越大；分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液； 分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。  减尾剂（除尾剂）：流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的相互作用，减轻或消除峰拖尾现象。 四、液相色谱流动相的选择?在化学键合相色谱法中，溶剂的洗脱能力直接与它的极性相关。 1.正相色谱 在正相色谱中，溶剂的强度随极性的增强而增加； 正相色谱的流动相通常采用烷烃加适量极性调整剂。 2. 反相色谱 流动相通常以水作基础溶剂，再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂，如甲醇、乙腈、四氢呋喃等。 极性调整剂的性质及其所占比例对溶质的保留值和分离选择性有显著影响。 一般情况下，甲醇-水系统是反相色谱最常用的流动相，具有粘度小、价格低的特点。 Snyder推荐采用乙腈-水系统。溶剂强度较高且粘度较小，并可满足在紫外205nm处检测的要求，但价格较贵。 3.梯度洗脱技术 在分离含极性差别较大的多组分样品时，为了使各组分均有合适的k’值并分离良好，也需采用梯度洗脱技术。 梯度洗脱（Gradient Elution） Solvent polarity (composition) continuously varied or stepped 梯度洗脱是指在一个分析周期中，按一定的程序连续改变流动相中溶剂的组成（如溶剂的极性、离子强度、pH值等）和配比，使样品中的各个组分都能在适宜的条件下得到分离。是分析复杂混合物特别是分离保留性能相差较大的混合物的极为重要的手段。 优点：改善峰形，提高柱效 缩短分析时间 强保留成分不易残留在柱上 缺点：会引起基线漂移 有时重现性差 故需严格控制梯度洗脱的实验条件。 *