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附件9： 清咽功能评价方法 试验项目、试验原则及结果判定 Items, Principles and Result Assessment 1 试验项目 1.1 动物实验 1.1.1 体重 1.1.2 大鼠棉球植入实验 1.1.3 大鼠足趾肿胀实验 1.1.4 小鼠耳肿胀实验 1.2 人体试食试验：咽部症状、体征 2 试验原则 2.1 动物实验和人体试食试验所列指标均为必做项目。 2.2 应对临床症状、体征进行观察。 2.3 在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。 3 结果判定 3.1 动物实验：大鼠棉球植入实验结果阳性，同时大鼠足趾肿胀实验或小鼠耳肿胀实验结果任意一项阳性，可判定该受试样品清咽功能动物实验结果为阳性。 3.2 人体试食试验：试食组自身比较及试食组与对照组组间比较，清咽功能检验方法 Method for the Assessment of Clear the Throat Function 1 动物实验 1.1 大鼠棉球植入实验 1.1.1 实验原理 采用棉球异物动物局部皮下，可与临床某些炎症后期病理变化相似的肉芽组织增生。 1.1.2实验动物150－220克。12只。 1.1.3剂量分组及受试样品给予时间 实验设三个剂量组和一个空白对照组，，必要时设阳性对照组。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。 材料手术器械、箱、天平、注射器1.1.5 实验步骤mg紧致的小棉球，经高压灭菌箱°C干燥3h，取出无菌条件下称重，干燥保存，备用。 1.1.5.2 肉芽肿的形成和测定 实验结束前8天，用脱毛器脱去大鼠两侧腹股沟乙醚浅麻醉大鼠条件下切大鼠两侧腹股沟，植入实验结束当天给受试1小时后断颈处死大鼠，剥离并取出棉球肉芽组织，箱60°C干燥1小时后称重，肉芽肿净量。 肉芽肿净量（mg）＝干燥后棉球肉芽肿重量－原棉球重量 1.1.6 数据处理和结果判定 F值。若F值 F0.05，结论为各组均数间差异无显著性；若F值≥F0.05（即P≤0.05），结论为各组均数间差异有显著性，需进一步使用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计分析。对非正态分布或方差不齐的数据需进行适当的变量转换，待满足正态分布或方差齐的要求后，用转换后的数据进行统计分析；若经变量转换仍不能达到正态分布或方差齐的目的，则改用秩和检验进行统计分析。 结果判定：实验组与空白对照组比较，肉芽肿净量明显下降，经统计处理差异有显著性，可判定该受试样品实验结果阳性。 1.1.7 注意事项 1.1.7.1 所用棉球重量表面积对实验结果影响较大在实验，所用棉球重量表面积近似。 1.1.7.2 以减少差异 1.1.7.3 植入棉球后，将切口缝合牢固，以免在实验过程中棉球脱落，影响实验结果。 1.2 大鼠足趾肿胀实验 1.2.1 实验原理 一定量致炎剂注入大鼠后肢足趾皮下，造成足趾肿胀测定足趾，比较实验组和对照组足趾变化足趾肿胀1.2.2 实验动物 同1.1.2。1.2.3 剂量分组同1.1.3 1.2.4材料：实验步骤 足趾肿胀实验结束当天再给受试样品一次，1小时后，大鼠足趾足趾大鼠右后足趾皮下注入1％0.1mL/只，分别1、、6小时测量足趾，同一部位测量次，取平均值。=肿胀值／致炎前足趾容积×100％ 1.2.6 数据处理和结果判定 F值。若F值 F0.05，结论为各组均数间差异无显著性；若F值≥F0.05（即P≤0.05），结论为各组均数间差异有显著性，需进一步使用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计分析。对非正态分布或方差不齐的数据需进行适当的变量转换，待满足正态分布或方差齐的要求后，用转换后的数据进行统计分析；若经变量转换仍不能达到正态分布或方差齐的目的，则改用秩和检验进行统计分析。 结果判定：实验组与空白对照组比较，任一时间点刺激前后明显减少，差异有显著性，可判定该受试样品大鼠足趾肿胀实验结果阳性。 1.2. 注意事项 1.2..1 致炎剂注入，应将动物后肢拉直，从右后足掌心向踝关节方向皮下注射致炎剂射1.2.7.2 测量足趾时，在鼠足某处用记号笔画线作为测量标线，将鼠足缓缓放测量筒内，当水平面与鼠足上的测量标线重叠时，踏动脚踏开关，记录足趾容积鼠足上鼠足放测量筒内最好由专人进行。1.2.7.3 每次测定的部位要固定。二甲苯为无色澄清液体，涂抹于小鼠耳廓后，由于其刺激作用，可引起鼠耳局部毛细血管充血，通透性增加，比较实验组和对照组耳直径9mm打孔器、致炎剂二甲苯、微量加样器、分析天平 18－22克，每组10－15只。 1.3.4剂量分组及受试样品给予时间 实验设三个剂量组和一个空白对照组，三个剂量组中应包括一个人体推荐量10倍的剂量组，必要时设阳性对照组。30天，必要时可延长至45天。 1.3