慢病毒转染步骤 慢病毒转染手册.doc

慢病毒转染步骤 慢病毒转染手册 导读：就爱阅读网友为您分享以下“慢病毒转染手册”的资讯，希望对您有所帮助，感谢您对92的支持! 目的细胞的效率； 如何由于目的基因较大而造成选择的载体不能携带Marker Gene的，可以通过Real-time RT-PCR检测目的基因的表达来拍评估感染效率。 注意： Invabio提供的病毒载体上带有GFP 绿色荧光蛋白，用户可以在病毒感染96小时后用倒置 荧光显微镜观察GFP 绿色荧光，以观察病毒对目的细胞的感染情况。 如果慢病毒载体携带其他Marker Gene如RFP\BFP可以用荧光显微镜在对应的激发光波长下观察荧光表达的情况 慢病毒表达时间较慢，荧光表达所需时间较长，建议感染后96小时后观测荧光表达。感染 后的细胞可以连续培养一周，通过观察荧光的表达时间和表达强度来确定慢病毒对目的细胞 的感染情况。感染期间请根据细胞生长的情况对细胞进行及时换液，以保证细胞良好的生长状态。 2、慢病毒使用安全使用规范 Invabio提供的慢病毒为“自杀”性病毒，即病毒感染目的细胞后不会再感染其他细胞，也不 会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒。慢病毒中的毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所 取代，属于假型病毒因此没有毒性作用。但该病毒仍然具有可能的潜在的生物学危险， Invabio建议不要使用编码已知或可能会致癌的基因的假型病毒。除非已经完全公认某个基 因肯定没有致癌性，否则均不建议采用假型病毒进行生物学实验。如有疑问，请与我们联系。 使用时请参照如下所示进行实验： 2.1．病毒操作时最好使用生物安全柜。如果使用普通超净工作台操作病毒， 请不要打开排风机。 2.2．病毒操作时请穿实验服，带口罩和手套。 2.3．操作病毒时特别小心不要产生气雾或飞溅。如果操作时超净工作台有病毒 污染，请立即用70%乙醇加1%的SDS 溶液擦拭干净。接触过病毒的枪头， 离心管，培养板，培养液请于84 消毒液或1%SDS 中浸泡过夜后弃去。 2.4．用显微镜观察细胞感染情况时应遵从以下步骤：拧紧培养瓶或盖紧培养 板。用70%乙醇清理培养瓶外壁后到显微镜处观察拍照。离开显微镜实验 台之前，用70%乙醇清理显微镜实验台。 2.5．如需要离心，应使用密封性好的离心管，或者用封口膜封口后离心，