流式细胞仪原理和一般用法-1.ppt

Partec - Excellence in Flow Cytometry 超过41年的研发经验 流式细胞仪数据格式 FCS：帧校验序列（FCS）字段，通常为16位（2个字节长），也可以为4个字节。软件执行中可以通过预先协议采用32位FCS来提高差错检测效果。 FCS 1.0 研发于1984年 FCS 2.0 研发于1990年，兼容1.0格式 FCS 3.0 研发于1997年，兼容前两者 支持UNICODE文本 处理单个数据文件大于100MB Partec - Excellence in Flow Cytometry 超过41年的研发经验 FCS文件结构 存储于3或4个片段中 文件头信息：用于鉴别FCS文件，包含鉴别文本文件片段的数值。 文本信息：描述样品信息和状态的某些数值。 数据：在文本信息中存储的数值的特殊格式。 Partec - Excellence in Flow Cytometry 超过41年的研发经验 文件头信息： 文本信息： Partec - Excellence in Flow Cytometry 超过41年的研发经验 参 数 FSC/SSC/荧光： 第一个细胞 第二个细胞 最后一个细胞 Partec - Excellence in Flow Cytometry 超过41年的研发经验 数据显示的种类 直方图 散点图 三维图 Partec - Excellence in Flow Cytometry 超过41年的研发经验 直方图 （用于单参数分析） 横坐标，X轴 表示光强度，强度高的光信号靠右侧显示。 纵坐标，Y轴 表示数量累计，相同强度的光信号在同一横坐标点（通道）内向Y轴方向累计。 FITC FITC FITC FITC FITC FITC FITC FITC FL1-FITC FITC FITC Partec - Excellence in Flow Cytometry 超过41年的研发经验 散点图 （用于双参数分析） 横坐标，X轴 表示光强度，强度高的光信号靠右侧显示。 纵坐标，Y轴 表示光强度，强度高的光信号靠上侧显示。 与X轴/Y轴平面900垂直相交，Z轴 表示数量累计，相同强度的光信号在同一横/纵坐标点（X/Y轴通道）内向Z轴方向累计。 Partec - Excellence in Flow Cytometry 超过41年的研发经验 什么是Region？ 用户在显示的图形中限定一个区域或范围作为靶区域或范围叫做Region。 在同一张图中可以设置多个Region。 使感兴趣的簇独立。 对Region使用颜色可更好地描述该范围或区域。 Partec - Excellence in Flow Cytometry 超过41年的研发经验 什么是Gate？ 1.使用布尔数学体系的操作方法（逻辑学）定义一个或将多个Region进行联合叫做Gate。 2.被定义的子集数据将被显示。 3.被选定的子集将被计算机计算数据和显示状态。 4.解除噪音信号并可以最终被存储在硬盘上。 Partec - Excellence in Flow Cytometry 超过41年的研发经验 什么是Mean？ 1.算术定义的平均值。 2.几何定义的平均值。 假设样品为V，数量为n，则： 算术定义的平均值=（V1+V2+V3…+Vn)/n 几何定义的平均值= Partec - Excellence in Flow Cytometry 超过41年的研发经验 如何取平均值？ 线性放大 对数放大 对数放大 算术平均值 算术平均值 几何平均值 （4*64+6*128+2*192+1*256）/13 （4*10+6*100+2*1000+1*10000）/13 =128 =972.3 =100 Partec - Excellence in Flow Cytometry 超过41年的研发经验 光谱交叉重叠与补偿？ 当一种激光束激发两种荧光染料而发射出两种不同波长的荧光时，这两种发射光会出现光谱部分重叠的现象，从而造成检测的准确性下降，必须使用适当的滤片或进行电子补偿来尽量减少光重叠对实验的影响。 FL-1 PMT FL-2 PMT FL-1 -