液态活检技术及其临床应用-1.ppt

液态活检技术及其临床应用 传统的肿瘤诊断技术 传统肿瘤 诊断技术 病理检验诊断 影像学检测 病理组织检查 （HE，IHC） 血清标志物检测 （CEA,PSA) 核磁共振成像（MRI） 正电子成像术（PET-CT） X射线断层扫描术（XRAY,CT） 超声波检测（B超） 内窥镜（Endoscope） 分子病理检测 （FISH, RT-PCR, NGS） 传统的肿瘤诊断存在的问题 早期筛查： 标记物不统一, 方法不够灵敏或是特异性不足。 临床诊断: 影像学：较灵敏，特异性不足，对病灶大小有要求。 病理学：金标准，但是需要组织样本，取样会带来创伤和扩散风险，很多晚期患者无法取样或取样不足。 治疗/复发转移监测： 影像学：结果普遍存在滞后性。 血清标志物：较灵敏，但是特异性不足；有些类型癌症没有合适的血清标志物。 2015年十大突破技术--液态活检技术 MIT Technology Review杂志发布了2015年度十大突破技术(10 Breakthrough Technologies 2015)的榜单。液态活检技术光荣上榜。 液态活检：快速、简便、无痛苦、无创伤的癌症血液检测方法 传统而又崭新的检测技术--“液态活检” “液态活检”的定义： A liquid biopsy is a liquid biomarker that can be easily isolated from many body fluids blood, saliva, urine, ascites, pleural effusion, etc.) and, as well as a tissue biopsy, a representative of the tissue from which it is spread.液体活检是一种液体生物标志物，可以容易地从许多体液中分离血液，唾液，尿液，腹水，胸腔积液等），以及组织活组织检查法，其是从其传播的组织的代表。 -- Christian Rolfo, Biochimica et Biophysica Acta, 2013. “液态活检”的标记物 CTCs ctDNA(cfDNA) 主要指来自于抗凝的外周血全血， 完整的肿瘤细胞 主要指来自于抗凝血外周血的血浆，片段化的DNA片段 一般认为来源于肿瘤原发灶/转移灶 肿瘤瘤细胞凋亡/坏死释放的DNA片段 活细胞，一般不宜长期保存 提取纯化后的核酸，可以保存 可以用于细胞学形态、结构分析；也可以分析细胞DNA、RNA、蛋白质等各类标志物 一般用于DNA突变监测、甲基化等DNA修饰相关分析 用于病情评价、预后判断，肿瘤早期诊断潜力不明确 用于个体化治疗，肿瘤早期诊断潜力相对明确 还有miRNAs，Peptides， Exosomes（外泌体），Secretomes（分泌物质组）等。 ctDNA（circulating tumor DNA），即循环肿瘤DNA，从字面意思来讲，指的是由肿瘤细胞释放到血液循环系统中的DNA。但是在了解ctDNA之前，我们要知道另一个与之相关的概念——cfDNA。 cfDNA（cell-free DNA），或者叫血浆游离DNA，是血浆中游离存在的DNA，它们有的来自于正常细胞，有的来自于异常细胞（如肿瘤细胞），还有部分来自于我们外部（如病毒DNA）。 来源： 1、来自于坏死的肿瘤细胞 2、来自于凋亡的肿瘤细胞 3、来自于肿瘤细胞分泌的外排物 什么是ctDNA ? 早在1947年，Mandel和Metais就发现血浆中存在游离的核酸分子。 1977年，Leon等人发现，肿瘤患者的血浆游离DNA水平要明显高于健康人群 又过了17年，人们才发现这种携带了突变信息的循环DNA是肿瘤的标志 人们逐渐明白，cfDNA中 携带肿瘤特有突变的那一小部分DNA，确确实实是由肿瘤细胞释放出来的，ctDNA的研究终于与肿瘤关联起来。 ctDNA的发现 在几乎所有种类的癌症中，都检测到了ctDNA所带有的标志性突变，并且肿瘤越晚期，病情越严重，肿瘤的恶性程度越高， ctDNA特有突变的频率就越高。一项针对15种癌症进行的ctDNA测序研究显示，分别有47%，55%，69%，82%的I-IV期癌症病人中能检测到高于一定频率的ctDNA突变；而另一项使用更高灵敏度测序技术的研究则表示，对于II期以上的病人，均能100%检测到突变。 不同分期癌症的ctDNA检出情况 不同癌症种类的ctDNA检出情况 CtDNA临床应用领域 CtDNA作为一种新的肿瘤标志物，将在肿瘤的诊断、治疗及预后检测等方面发挥重要的作用，尤其是对于一些不具有典型临床症状、检查无特异性和诊断困难的肿瘤可避免复杂的、具